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《基于线粒体DNA COⅢ基因序列研究四个长蛸Octopus variabilis野生群体的遗传多样性【开题报告+文献综述+毕业论文】》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、本科毕业论文开题报告生物科学基于线粒体DNACOⅢ基因序列研究四个长蛸Octopusvariabilis野生群体的遗传多样性一、综述本课题国内外研究动态，说明选题的依据和意义长蛸学名Octopusvariabilis,隶属软体动物门，头足纲，八腕目，蛸科(Octopodidae)，俗称长八带鱼(短蛸俗称八带鱼)、鲅须。胴部短小，亚圆或卵圆形。头足部具有肉腕4对，一般腕的长度相当于胴部的2～5倍，腕上有大小不一的吸盘。无肉鳍，壳退化。真蛸体中型，一般全长50厘米。胴部椭圆形，背部有疣突起。各腕长度相近，侧腕稍
2、长，腹腕稍短，腕上具吸盘4个。体褐色，胴背具十分明显的灰白色斑点长蛸体中型，全长50～70厘米。胴部呈长椭圆形，表面光滑。头部狭，眼小。腕长，各腕长短悬殊。其中第1对腕最粗最长，约40～50厘米，是第4对腕长度的2倍。肮上有吸盘2行。体粉红色。长蛸在我国南北各海区均有广泛分布，其中北部海区略多。长蛸个体大、肉质肥厚鲜美、营养丰富，富含蛋白质和氨基酸，可食用部分占总体的90％以上。肉除鲜食外，还可以加工成干制品，食用方式多种多样。其内骨骼(中药名海螵蛸)和墨囊具有较高的药用价值，有止血、抗癌等功效。因而长蛸具
3、有较高的经济价值。目前我国产长蛸除少量内销外，大多数出口韩国，供不应求。在天然海区长蛸主要营底栖生活，为沿岸底栖种类。春季长蛸多在低潮线以上活动，夏秋两季多在潮间带中区，冬季则在潮下带深潜，具有短距离的生殖和越冬洄游习性。其多利用腕足在海底爬行，也能凭借漏斗喷水的反作用短暂游行于底层海水中。其生活场所多为泥底，少数为沙泥底或礁石底。长蛸可用其腕足挖洞栖居，尤其在其繁殖季节。天然海区长蛸多将卵产在自挖的洞中孵化，少数产在礁石缝隙及海螺壳中。主要以蟹类、虾类、贝类和底栖鱼类为食，其摄食凶猛，通常在夜间进行摄食活
4、动。遇敌害或受到惊扰时会喷射墨状液体掩护其逃走。目前，有关长蛸的研究主要集中在形态学、组织学、生理生态、人工育苗及养殖等方面[1~5]。分子遗传学方面的研究不多，仅见高强等[6~7]采用等位酶技术对我国渤海海域长蛸群体的遗传变异进行了分析，常抗美等[8~9]对中国沿海长蛸群体线粒体COI的遗传变异进行了研究，李焕等[10]研究了中国沿海四个长蛸群体16SrRNA基因的遗传变异。在此研究背景下，本文采用线粒体基因COⅢ序列分析技术对黄海、渤海、东海4个地理群体长蛸资源的遗传变异和种群结构进行研究，从而研究遗传
5、多样性与遗传变异之间的关系。二、研究的基本内容，拟解决的主要问题：1、基本内容：通过运用生物学基本原理和生物技术手段来研究大连、青岛、舟山、厦门四个地区的长蛸Octopusvariabilis线粒体DNACOⅢ基因；运用PCR技术对DNA分子进行体外扩增。2、拟解决的主要问题：对大连、青岛、舟山、厦门四个地区的长蛸Octopusvariabilis线粒体DNACOⅢ基因序列的测定来研究四个野生群体的遗传多样性，来讨论遗传多样性与遗传变异的关系。三、研究步骤、方法及措施：1、样品的采集长蛸样品于2008年1~
6、6月期间采取自我国渤海、黄海、东海海域，采集地点分别辽宁大连(DL)、山东青岛(QD)、浙江舟山(ZS)、福建厦门(XM)，各采样地点取长蛸活体新鲜肌肉保存于95%酒精，带回实验室备用。2、DNA的提取、扩增及测序取长蛸外套肌组织，采用《分子克隆实验指南》(Sambrooketal.,2002)蛋白酶K、酚/氯仿提取法（稍作修改）提取基因组DNA。细胞色素氧化酶亚基Ⅲ基因片断的扩增引物源自文献(Allcocketal.,2008;Simonetal.,1990;Guziketal.,2005;Simonet
7、al.,1994)，COⅢ基因片段的两条引物分别为：F1(5′CAATGATGACGAGATATTATYCG3′),R1(5′TCAACAAAGTGTCAGTATCA3′);引物由上海英骏生物技术公司合成。PCR反应体系为：总体积25µl，其中25mMdNTPs0.25µl,ddH2O13.5µl,10×buffer2.5µl,5U/µlTaqDNApolymerase0.25µl,20mMMg2+2.5µl,l0µM引物各2.5µl;循环条件为：94℃预变性5min,94℃40s,50℃40s,72℃90
8、s,38个循环后，72℃延伸10min。两个基因的PCR反应条件相同。PCR扩增产物纯化后送交上海英骏生物技术公司测序。3、数据分析序列结果利用MEGA3.1软件(Kumaretal.,2004)中的ClustalX插件(Thompson,etal.,1997)进行DNA序列排列，并辅以人工较对。用MEGA3.1软件进行序列比较和变异检测，确定变异位点和单倍型。用DnaSP4.10软件(Rozasetal.,20
