医学论文-抗组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶单克隆抗体的制备及初步鉴定

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1、医学论文-抗组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶单克隆抗体的制备及初步鉴定【摘要】 制备均一性和特异性高的抗组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶抗体，为研究皮肌炎和多肌炎的检测提供方法，为制备检测试剂盒提供原料。【方法】采用常规融合和间接ＥＬＩＳＡ检测法，获取杂交瘤细胞株；ＰｒｏｔｅｉｎＧＳｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦＦ和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０结合对含有单克隆抗体的腹水进行纯化；ＳＤＳ-ＰＡＧＡ电泳技术进行单克隆抗体的鉴定。【结果】筛选获得了２株稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为Ｗ００１和Ｗ００２；杂交瘤细胞克隆后，１００％的检测孔保持了分泌抗组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶抗体的能力；腹水纯化达到了较理想的效果；

2、该２株单克隆抗体能特异性针对组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶，并能跟天然的蛋白结合。【结论】所制备的均一性和特异性高的抗组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶抗体，可直接用于在ＥＬＩＳＡ、免疫印迹、免疫组化学等研究方面，达到了试验的目的。【关键词】 组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶抗组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶单克隆抗体鉴定　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏｐｒｏｄｕｃｅａｎｔｉ-ｈｉｓｔｉｄｙｌ-ｔＲＮＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ，ｗｈｉｃｈｅｎｊｏｙｈｉｇｈｄｅｇｒｅｅｏｆｈｏｍｏｇｅｎｅｉｔｙａｎｄｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎ，ｔｏｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｔｅｓｔｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｄｉｓ

3、ｅａｓｅｓｏｆｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓａｎｄｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ．Ｂｅｓｉｄｅｓ，ｔｏｐｒｏｄｕｃｅｍａｔｅｒｉａｌｓｆｏｒｔｈｅｔｅｓｔｌｉｑｕｉｄ．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】ＷｉｔｈｔｈｅｒｅｇｕｌａｒｃｏｍｂｉｎｅｄｍｅｔｈｏｄｓａｖａｉｌａｂｌｅａｎｄｉｎｄｉｒｅｃｔＥＬＩＳＡｔｏｏｂｔａｉｎｈｙｂｒｉｄｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓ；ｔｏｐｕｒｉｆｙｔｈｅａｓｃｉｔｅｓｗｉｔｈｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｉｎｔｈｅｃｏｍｂｉｎｅｄｕｓｅｏｆＰｒｏｔｅｉｎＧＳｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦＦａｎｄＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０；ｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ

4、ｗｉｔｈｔｈｅｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】Ｔｗｏｈｙｂｒｉｄｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓ，ｎａｍｅｄＷ００１ａｎｄＷ００２，ｈａｖｅｂｅｅｎｆｏｕｎｄｉｎｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈ，ｗｈｉｃｈｃａｎｓｅｃｒｅｔｅａｎｔｉ-ｈｉｓｔｉｄｙｌ-ｔＲＮＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｓｔａｂｌｙ．Ａｆｔｅｒｔｈｅｃｅｌｌｓｏｆｈｙｂｒｉｄｏｍａｂｅｉｎｇｃｌｏｎｅｄ，１００％ｃｈｅｃｋｉｎｇｈｏｌｅｓｋｅｅｐｔｈｅｃａｐａｂｉｌｉｔｙｏｆｓｅｃｒｅｔｉｎｇａｎｔｉ-ｈｉｓｔｉｄｙｌ-ｔＲＮＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｍｏｎｏｃｌｏｎ

5、ａｌａｎｔｉｂｏｄｙ．ＡｎｄｔｈｅａｓｃｉｔｅｓｏｆｔｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｈａｓｂｅｅｎｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙＰｒｏｔｅｉｎＧＳｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦＦａｎｄＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０，ｉｎｗｈｉｃｈｔｈｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｗａｓｓａｔｉｓｆｙｉｎｇ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅｔｗｏｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｉｒａｂｉｌｉｔｙｔｏｃｏｍｐｏｓｅｍｏｌｄ，ａｎｄｔｏｉｎｔｅｇｒａｔｅｗｉｔｈｎａｔｕｒａｌａｌｂｕｍｅｎ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｔｈｅａｎｔｉ-ｈｉｓｔｉｄｙｌ-ｔＲＮＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎ

6、ｔｉｂｏｄｉｅｓｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙａｒｅｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓａｎｄｄｉｓｔｉｎｃｔｉｖｅ，ｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｕｓｅｄｄｉｒｅｃｔｌｙｉｎｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆＥＬＩＳＡ，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔａｎｄＩｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｅｔｃ．Ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ，ｔｈｅａｉｍｏｆｔｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈｈａｓｂｅｅｎａｃｈｉｅｖｅｄ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｈｉｓｔｉｄｙｌ-ｔＲＮＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ；ａｎｔｉ-ｈｉｓｔｉｄｙｌ-ｔＲＮＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ；ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　　抗组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶抗体是一类结

7、缔组织病中的多肌炎（ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ）和皮肌炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ，ＰＭ／ＤＭ）的标志性自身抗体。ＰＭ／ＤＭ指横纹肌弥漫性炎症疾患，主要累及对称性的近端肢带肌，颈和咽部肌肉无力和萎缩，严重者导致心肌、呼吸肌群受累，引起死亡。只出现肌痛肌无力现象者称多肌炎；在多肌炎的基础上，出现典型皮疹者称皮肌炎。ＰＭ／ＤＭ是自身免疫性疾病，临床检验发现２５％～３０％的患者含抗组氨酰-ｔＲＮＡ合成酶抗体［１］（临床上又称抗Ｊｏ-１抗体），而其他抗合成酶抗体在ＰＭ／ＤＭ中的阳性率仅为１％～３