梅毒螺旋体感染临床检测程序的建立、结果报告和解释

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1、梅毒螺旋体感染临床检测程序的建立、结果报告和解释卫生部临床检验中心李金明Pandora和她的魔盒古希腊语中，"潘"（Pan）是所有的意思，而"多拉"（Dora）则是礼物梅毒的英文名称为Syphilis（西菲利斯），源于拉丁语。据考最早以此称谓梅毒是在16世纪的上半叶。梅毒螺旋体即苍白螺旋体（treponemapallidum,TP）为梅毒的病原体，亦称为梅毒密螺旋体，是1905年由Schandim和Hoffman首先发现的。梅毒螺旋体的抗原结构外膜脂蛋白抗原轴丝抗原4D抗原外膜脂蛋白抗原有47KDa、44.5KDa、43KDa、36KDa、3

2、4KDa、17KDa、15KDa等成分。47KDa成分含量最高，由367个氨基酸所组成，具有强免疫原性，是梅毒螺旋体的主要免疫优势抗原。该成分与另两种致病性密螺旋体（treponemapertenue和treponemaendemicum）抗原成分有交叉反应。17KDa成分由156个氨基酸组成，具有梅毒螺旋体抗原特异性，不与（treponemaphagedenis）发生交叉，与人类正常血成分亦无交叉反应。轴丝抗原轴丝是梅毒螺旋体的运动器官主要由33KDa、35.5KDa核心单位和37KDa鞘亚单位聚合而成37KDa抗原成分含量最高，其免疫原

3、性亦很强，可以刺激机体产生细胞和体液免疫应答。4D抗原4D抗原为梅毒螺旋体特异性表面抗原为分子量190KDa的单体聚合物均匀分布于螺旋体表面，为有序环状结构耐热、耐碱，但对酸较敏感。机体对梅毒螺旋体感染的抗体应答非特异性类脂质反应素抗体抗密螺旋体的特异性抗体非特异性类脂质反应素抗体即抗心磷脂（cardiolipin）抗体，又称为反应素，多为IgA和IgM混合型抗体此类类脂质抗体在体外可增强巨噬细胞对梅毒螺旋体的吞噬作用未经治疗的梅毒患者血清中反应素可长期存在，经适当治疗后可逐渐减少，直至消失。抗密螺旋体的特异性抗体早期患者以产生针

4、对梅毒螺旋体轴丝中37KDa鞘亚单位成分的IgM抗体为主，另外还有针对梅毒螺旋体多肽（分子量分别为45、42、33、30、16.5、15.5KDa）的抗体二期梅毒时，则血循环中可出现抗全部梅毒螺旋体抗原的IgM和IgG抗体，对多肽的抗体除了以上六种外，又增加了另外16种多肽抗体。如经治疗，IgM抗体浓度降低，血清中只能检出IgG抗体。当疾病进入晚期时，则血循环中的某些抗梅毒螺旋体抗原多肽的抗体会逐步消失。经典的梅毒血清学试验补体结合试验：1906年由Wasserman建立，是最早使用的梅毒螺旋体感染诊断的血清学试验絮状沉淀试验：1920年由

5、Kahn建立使用类脂质抗原的血清学试验性病研究实验室试验（Venerealdiseaseresearchlaboratorytest,VDRL）不加热血清反应素试验(Unheatedserumreagintest,USR)显微镜观察结果快速血浆反应素环状卡片试验(Rapidplasmareagincirclecardtest，RPR)甲苯胺红不加热血清试验（Toluidineredunheatedserumtest，TRUST）肉眼观察结果VDRL二十世纪50、60年代最为常用的梅毒血清学试验所用的抗原是从牛心中提取的心磷脂和从鸡蛋黄中提

6、取的卵磷脂及胆固醇等有效成分梅毒螺旋体在破坏机体组织的过程中，体内释放一种心磷脂抗原，这种抗原可刺激机体产生相应的抗体即反应素，其与牛心中提取的心磷脂在体外可产生免疫结合反应试验中所用的卵磷脂的作用是加强心磷脂的抗原性，胆固醇可增强抗原的敏感性心磷脂和卵磷脂都是醇溶性脂类，在水中可形成胶体溶液。胆固醇遇水则析出结晶，此结晶即成为反应时的载体，外周包裹上心磷脂和卵磷脂而成为一种胶体微粒。这种微粒遇到上述的反应素后，其即粘附在胶体微粒的周围，形成疏水性薄膜。试验时的摇动，使得颗粒互相粘附而形成显微镜下乃至肉眼可见的颗粒凝集或凝集沉淀，即为阳性。而非

7、梅毒感染者血清中的白蛋白多于球蛋白，白蛋白对胶体颗粒有保护作用，形成亲水性薄膜，由于抗原颗粒周围没有粘附有抗体分子，既使是试验中的摇动碰撞也不能形成较大的颗粒和显微镜及肉眼下可见的凝集或沉淀，从而为阴性反应。VDRL玻片试验有几个明显的缺点，即（a）抗原需要每天配制；（b）血清标本要加热灭活处理；（c）需在显微镜下观察结果。因此，后来又推出了改良的USR和RPR等方法。不加热血清反应素试验(Unheatedserumreagintest,USR)本方法对VDRL抗原进行了改良，其将VDRL抗原用稀释液稀释后，再将该抗原悬液离心，然后在沉淀物中加入

8、含有EDTA-Na、氯化胆2碱和防腐剂的一定量的缓冲液。EDTA可使抗原半年内不变性氯化胆碱对补体有化学