无菌保证基本原理与实际应用

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1、CCD无菌保证基本原理与实际应用马涛药品认证管理中心人员要求足够的数量、适当资质、实践经验书面的岗位工作职责岗位职责不得遗漏、交叉的职责应有明确规定个人承担的职责不应当过多所有人员必须经过培训并考核职责委托人员卫生药品认证管理中心前言-3-药品认证管理中心基本概念药典和GMP对无菌保证水平的定义系指无菌药品中存在活微生物的概率最终灭菌产品：无菌保证水平不超过一百万分之一非最终灭菌产品：以培养基灌装零污染为目标，实际污染率低于1/5000-4-药品认证管理中心药品达到法定标准的关键三个关键方面能充分杀灭污染微生物已灭菌的产品不被再污染消除带

2、菌产品混入已灭菌产品的风险三个核心问题产品和灭菌工艺设计－－达标的基础工程设计和建设－－实现设计目标的硬件日常的运作管理－－实现设计目标的软件-5-药品认证管理中心解决问题的钥匙知识无菌保证的理论技能－－应用知识解决问题的能力消除威胁无菌保证的潜在风险因素-6-药品认证管理中心第一部分无菌保证基本原理-7-药品认证管理中心微生物基础－常见微生物种类基本特点0.5～5μm，生长态时不耐热，部分细菌能形成耐热芽孢5μm～50μm，形成芽孢随空气扩真菌散，不耐热病毒小于0.1μm，一般不耐热-8-药品认证管理中心微生物分布特点气源性微生物革兰氏阳性菌较多G+

3、它们可形成芽孢G-水源性则革兰氏阴性菌居多不会形成芽孢，耐热性差但会产生细菌内毒素-9-药品认证管理中心芽孢及其特点（一）当某些细菌遇到不良生存环境条件时，为保护自身，在细胞内形成一外壁厚而坚硬的休眠体，该休眠体即称芽孢（Spore）或孢子。对不良环境如热、化学消毒剂的耐受性远高于生长态细胞环境条件适宜，恢复生长和繁殖-10-药品认证管理中心芽孢及其特点（二）耐热80℃下长期存活100℃下有相当高的存活率100℃以上死亡过程符合一级动力学方程影响芽孢耐热性的因素芽孢存在的介质受热时的湿度-11-药品认证管理中心热对微生物的作用当高温破坏了细胞中起

4、生命作用的蛋白质、酶及核酸时，细胞死亡。实验证明微生物受热死亡速度符合一级动力学方程，简称对数规则-12-药品认证管理中心微生物存活数与灭菌时间关系图lgNY轴：活微生物数量的对数3X轴：时间为10进制普通座标21t102030半对数座标-13-药品认证管理中心芽孢的耐热参数：D值lgN指一定温度下将4D=t2-t1微生物杀灭90％单位：分钟3或下降一个对数2单位所需要的时1D间。t1t2t-14-药品认证管理中心灭菌温度对D值的影响lgN115℃125℃121℃△lgN=1tD125D121D115灭菌温度低时，达到同一灭菌效果的时间就长-15-药品认证管理中心

5、F值：达到同一灭菌效果的概念0F0值即标准灭菌时间lgN指产品在灭菌过程中获得的与标准参LgNo照条件（121℃）相同灭菌效果的曝热时间LgN△LgNt121117t1℃t2℃tFo-16-药品认证管理中心不同灭菌温度下的灭菌率灭菌温度℃灭菌率L灭菌率：为达到与某一温度下灭菌1分钟相同的灭菌效果，在1000.008121℃下灭菌所需要的灭菌时1050.025100℃灭菌时1分钟，相当于1211120.126℃灭菌0.008分钟，即Fo值为0.008分钟1150.251105℃灭菌40分钟时，Fo约为11160.316分钟，能使D值为1分钟的芽孢数1180.501

6、量下降1个对数单位1200.7941211.0001221.251231.59-17-药品认证管理中心lgN54无菌保证水平与F0、D值及带菌量的关系3-lgSAL＝F0/D–lgN02SAL:无菌保证水平N0:灭菌前微生物污染量1123456789101112分0-1-2-3-4-5-18--6药品认证管理中心灭菌过程的Fo示意T℃L（灭菌率）升温保温冷却产品温度腔室温度t（分）灭菌过程的温度-时间曲线-19-药品认证管理中心“无菌”的标准及理论“每批产品中，污染品概率不得超过一百万分之一”，无菌的这一量化标准应当可以用试验来证明的。用无菌检查法显然是不可能的。

7、然而，每瓶产品微生物存活的概率却可计算的。这就需要测试产品灭菌前微生物污染数、D值，使用对数规则，并用生物指示剂试验来证实。量化指标+计算+试验，使无菌标准成为工业界可执行的标准-20-药品认证管理中心无菌保证水平举例假定灭菌开始时产品中的污染微生物总数（N0）为100cfu/瓶，污染微生物的耐热参数（D）为1分钟，要达到药典规定的SAL的标准，灭菌F0值应达到多少？相当于121℃和115℃下灭菌多少分钟？答：F=（-lgSAL＋lgN）×D=（6+lg100）×1=800分钟，需在121℃下灭菌8分钟。换算成115℃下的灭菌时间是：F0/