持续与间歇低载荷机械振动作用下Wnt-β-catenin信号通路对骨折愈合影响的实验研究

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1、分类号：Ｒ６８１单位代码：１０１８３研究生学号：２０１５７３４１７８密级：公开吉林大学硕士学位论文专业学位（）持续与间歇低载荷机械振动作用下Ｗｎｔ／β－ｃａｔｅｎｉｎ信号通路（对骨折愈合影响的实验研究Ｅｘ－ｒｉｔａｐｅｍｅｎｌｓｔｕｄｏｎｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＷｎｔ／ｂｅｔａｃａｔｅｎｙｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｏｎｆｒａｃｔｕｒｅｈｅａｌｉｎｕｎｄｅｒｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓａｎｄｉｎｄｇｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔｗｌｏｌｏａｄｍｅｃｈａｎｉｃａｌｖｔｉｂｒａｉｏｎ

2、作者姓名：郝宝辉类别：临床医学硕士领域（方向）：外科学指导教师：秦大明教授培养单位一：吉林大学白求恩第医院２０１８年６月％－ｃａｔｅｎ持续与间歇低载荷机械振动作用下Ｗｎｔ／０ｉｎ信号通路对骨折愈合影响的实验研宄Ｅｘｅｒ－ｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｏｎｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＷｎｔ／ｂｅｔａｃａｔｅｎｉｎｓｉｎａｐｙｇｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｏｎｆｒａｃｔｕｒｅｈｅａｌｉｎｇｕｎｄｅｒｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓａｎｄｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔｌｏｗｌｏａｄｍｅｃｈａｎｉｃａ

3、ｌｖｉｂｒａｔｉｏｎ作者姓名：郝宝辉领域（方向外科学指导教师：秦大明教授类别：临床医学硕士答辩口期：年／月工日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学博士（或硕士）学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除文中己经注明

4、引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名４曰期：年４Ａ曰＞中文摘要持续与间歇低载荷机械振动作用下Wnt/β-catenin信号通路对骨折愈合影响的实验研究研究背景和目的：骨骼在人体起着支撑身体的作用，随着人们生活水平的提高和医疗水平的发展，人均寿命普遍延长，骨质疏松症和各种原因导致骨折的患者也逐年增多。对于一些重大车祸、手术导致的骨折延迟愈合和骨折不愈合是困扰骨

5、科医生的一个重要课题。有研究表明老年骨折中骨质疏松导致骨折的概率为69.4%。临床上对骨质疏松及骨折的治疗大多是使用药物和手术治疗，虽然具有一定的疗效，但是也带来的很多副作用。近年来研究发现适当的应力刺激可以促进骨形成,但是不同的应力刺激强度及频率影响成骨的效果不同。近些年来有关实验研究证实持续与间歇低载荷机械振动（频率32-37Hz，加速度0.2-0.3g）可以促进骨的成长、促进骨折愈合，对抗骨质疏松。我们课题组已经在低载荷机械振动促进骨生长、对抗骨质疏松方面进行了多年的研究，本课题主要是在间歇低载荷机械振动加载条件下，从Wnt/β-ca

6、tenin信号通路、通路的特异性阻断剂Dkk1、细胞骨架等方面对间歇低载荷振动促进MC3T3-E1细胞成骨机制做出研究。为今后临床工作中治疗骨质疏松及促进骨折愈合提供一种新的治疗思路和理论支持。实验方法：1、持续与间歇低载荷机械振动对MC3T3-E1细胞内Wnt/β-catenin信号通路、Runx2因子的调控I方法：基础对照组（Control）：空白对照组，每日加载振动。每日振动30min（SV0.5h）：每日实施持续30min的振动加载。每日振动15min×2＋30min间歇（IV0.5h）：每日实施两次各15min的振动加载，期间间歇

7、30min。采取RT-qPCR、Westernblot方式检测细胞内β-cateninmRNA、Runx2mRNA、β-catenin蛋白表达程度。2、持续与间歇低载荷机械振动作用下Wnt/β-catenin通路对MC3T3-E1成骨效应的调控方法：将实验分为以下四组，空白对照组（Control），每日实施两次各15min的振动加载，期间间歇30min组（IV0.5h）+DKK1（0.2mg/mL）组，DKK1（0.2mg/mL）处理组，每日实施两次各15min的振动加载，期间间歇30min组（IV0.5h）组。待细胞贴壁生长至70%左右，

8、家阻断剂组每组加阻断剂DKK1（0.2mg/mL），不加阻断剂组加等量PBS液，放置于培养箱中培养48小时，然后加载振动组开始施加间歇低载荷机械振动，不加载振动无论组相同环境下但