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时间:2019-09-14
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1、专业知识病理解剖的意义:收集病理教学机科研资料的一个重要途径,大量病理资料的积累促进了医学的发展与进步。通过解剖尸体观察和发现死者器官、组织的病理变化,找出主要病变,分析判断直接死亡原因的一种重要方法。可以验证临床诊断的正确性及治疗效果,发现临床诊断和治疗上存在的问题,最后通过临床病理讨论会的形式,实现病理和临床的交流与统一。病理解剖室的清洁与消毒地面及靠近地面的墙壁用水冲洗干净。紫外线灯进行空气消毒,照射剂量不小于9000Uw-s/cm2。室内温度不低于20度,相对适度不超过50%,照射20~30分钟。必要时喷雾2%过氧乙
2、酸8ml/m2密闭消毒30分钟。解剖器械的消毒清水冲洗干净,浸泡在1:1000苯扎溴铵内含0.5%亚硝酸钠溶液中4~6小时、10%甲醛水溶液中2~4小时。个人防护戴橡胶手套,外再戴薄质纱手套,戴上口罩、帽子,穿手术衣,外戴塑料围裙。固定将组织浸入某些化学试剂,是细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位置。意义是保存组织细胞的抗原性,使抗原物质不发生弥散和抗原性丧失。作用:保持细胞与生活时的形态相似、保持细胞内特殊的成分与生活状态时相仿、便于区别不同组织成分、有利于切片、固定剂的不良影响(影响常规染色、固定造成物质损失、
3、组织皱缩)。固定剂的选择细胞内物质与固定剂的关系:组成细胞的主要成分为蛋白质、脂类、糖类,根据研究目的的不同选择不同的固定剂。Masson染色,甲醛升汞、Zenker液、bouin液。嗜铬细胞,含铬的固定液。细胞内糖原,用Carnoy液。固定液的量(组织块总体积的4~5倍)穿透力(<2~3mm/24h或0.5cm的多孔疏松组织)时间(固定24小时后保存于70%乙醇。一般3~24小时)特殊固定(制备1um厚的半薄切片,先用戊二醛固定再用饿酸进行二次固定)固定容器(相对大些,防止组织与容器粘连产生固定不良。瓶底垫一棉絮,使固定液
4、均匀渗入组织块。轻轻搅动,利于渗入。)单纯固定剂甲醛(40%甲醛气体水溶液,又称福尔马林。)渗透力强,固定均匀,组织收缩小。固定保存大体标本。甲醛色素:甲醛氧化产生的蚁酸在组织中与血红蛋白结合形成棕色的甲醛色素。Ⅰ类:醛类,甲醛,戊二醛,多聚甲醛,丙烯醛,已二醛,丙二醛等。Ⅱ类:氧化剂类,四氧化锇(奥酸),高锰酸钾,重铬酸钾等。Ⅲ类:蛋白变性类,甲醇,乙醇,醋酸等。Ⅳ类:其他,氯化汞,苦味酸等。重铬酸钾:橘红色结晶,有毒性,1%~3%水溶液。固定高尔基体和线粒体。苦味酸:黄色结晶体,强酸易燃易爆。沉淀一切蛋白质,穿透慢,组织
5、收缩明显,组织无明显硬化。升汞:针状结晶。5%~7%饱和水溶液。固定蛋白质。醋酸:保存染色体。铬酸:三氧化铬的水溶液。0.5%~1%。线粒体和高尔基体。饿酸:四氧化饿,淡黄色结晶,1%~2%的水溶液,脂类。丙酮:酶组织化学的各种酶的固定。三氯醋酸:无色易潮解的结晶体。蛋白质沉淀。乙醇:80%~95%,糖原的固定。(1)B-5固定液淋巴组织(2)Bouin氏固定液外科活检标本、结缔组织染色(三色较佳)(3)Carnoy氏液胞质和胞核,染色体固定佳(4)Miiller氏液媒染和硬化神经组织(5)Orth氏液胚胎组织、神经组织、脂
6、肪组织(6)PFG液肽类抗原的固定,免疫电镜研究(7)PLP液和PLPD液富含糖类组织的固定(8)Rosman液糖原固定好(9)Zenker液固定多种组织,使细胞核和细胞质染色较清楚,常用三色染色(10)4%多聚甲醛-0.1mol/LPB适用光镜免疫组化(11)4%多聚甲醛-磷酸二钠/氢氯化钠液光镜和电镜免疫组化(12)甲醛-钙液脂肪组织和组织化学染色(13)乙醇-甲醛液皮下组织肥大细胞(14)乙醚-酒精液细胞涂片(15)中性缓冲甲醛液免疫组化(16)中性甲醛液常用(40%甲醛120ml、蒸馏水880ml、磷酸二氢钠4g、磷
7、酸氢二钠13g。)组织的脱水和脱水剂脱水:借某些溶媒置换组织内水分的过程。酒精脱水能力强,硬化组织,收缩明显,梯度脱水丙酮快速脱水或固定兼脱水异丙醇乙醇替代品,收缩小,硬化作用弱正丁醇脱水后的组织科直接浸蜡和包埋,电镜中的中间脱水剂透明:组织块中的水分被溶剂取代,其折射指数接近于组织蛋白的折射指数,组织块变得透亮。二甲苯:常规透明剂,折射指数1.50,对组织的收缩性强,易使组织变硬变脆。石蜡切片:组织经石蜡包埋制成蜡块,用切片机制成切片的过程。一般厚度4~6um。蛋白质的着色原理:蛋白质分子中的氨基酸残基含有酸性基团或碱性基
8、团,可以与染料分子以离子键、氢键、配价键结合。核酸染色原理:核酸包括DNA和RNA。是由单核苷酸连接而成的大分子。在DNA双螺旋结构中,两条核酸链上的磷酸基向外,并电离为负离子,使DNA双螺旋的外侧带负电荷,易和带正电荷的碱性染料以及媒染染料以离子键或氢键相结合。胞质的主要成分:蛋白质、R
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