分子诊断重点

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1、1、基因——DNA分子中含有特定遗传信息的核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。合成有功能的多肽链或RNA所必需的全部核酸序列（通常是DNA序列）。2、基因组：广义：一物种的全部遗传物质及其携带的遗传信息。狭义：单倍体细胞中的全套染色体（人：22条常染色体+X，Y+线粒体DNA）3、断裂基因：基因的编码序列在DNA上不是连续的，而是被不编码的序列隔开。4、重叠基因：基因组DNA中某些序列被两个或两个以上的基因所共用。基因重叠现象在病毒基因组中普遍存在。5、跳跃基因：即转座子，在哺乳动物体内一般含有

2、几十万个跳跃基因DNA；6、基因家族指核苷酸序列或编码产物的结构具有一定程度同源性的一组基因7、假基因（pseudogene):在多基因家族中有的成员并不能表达出有功能的产物，用ψ表示。8、SNP：单核苷酸多态性指单个核苷酸变异而形成的DNA分子多态9、质粒：细菌细胞染色体以外，能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子10、转座因子又称转座元件（transposableelement），是一类在细菌染色体、质粒或噬菌体之间自行移动并具有转位特性的独立的DNA序列11、微卫星：广泛分布在原核和真核生物

3、基因组中，常出现在基因的非编码区和染色体末端，重复序列长度仅为1—6bp，呈串联重复排列。12、黏性末端:对于双链DNA病毒而言，基因组双链两端具有能够互补的单链DNA部分，称为粘性末端13、原核生物基因组的特点1.原核生物基因组：DNA原核生物基因组DNA较小,基因数目较少原核生物基因组中只有一个DNA复制起点;2原核生物的操纵子结构;操纵子结构是原核生物基因组的功能单位,原核生物的结构基因大多数按功能相关性成簇地串联排列于染色体上;3.原核生物的结构基因多数是单拷贝基因，只有编码rRNA和tR

4、NA的基因有多个拷贝;4原核生物结构基因的编码顺序一般不重叠;5.具有编码同工酶的不同基因6.GC含量差异大7.非编码区内主要是一些调控序列;8.具有可移动的DNA序列第三章分子克隆1、分子克隆：按照人的意愿，在体外将制备的DNA片段与载体重组，然后导入受体细胞，并在受体细胞中复制、扩增，以获得该DNA分子的大量拷贝，此过程称为分子克隆，也称基因克隆或DNA克隆或重组DNA(recombinantDNA)。2、质粒：是细菌染色体以外具有自主复制能力的小型双链环状DNA分子，能自我复制并表达其所携带

5、的遗传信息3、限制性核酸内切酶：RE是一类能识别和切割双链DNA特定核苷酸序列的核酸内切水解酶4、分子克隆的基本步骤：1、目的基因的制备；2、载体的选择和制备；3、目的基因与载体连接；4、重组DNA导入受体细胞；5、目的基因的筛选与坚定插入失活的原理：一般情况下选用含有两个以上的抗药基因的载体，外源DNA片段插入其中一个基因，并导致这个基因的失活，就可用两个含不同药物的平板，互相对照，筛选含重组DNA的菌落，这就是插入失活效应。蓝白斑实验：许多载体都带有一个编码β-半乳糖苷酶基因的调控序列和N端1

6、46个氨基酸的编码序列，在编码序列中插入了一个多克隆位点，但不破坏阅读框架，不影响功能。当这种载体转入的宿主细胞是含有β-半乳糖苷酶C端编码序列时，此酶的N端序列和C端序列可以互补，产生具有酶活性的蛋白质，从而使宿主细菌在IPTG/X-gal的培养基上呈蓝色，当多克隆位点有外源DNA片段插入时，破坏此酶的N端阅读框架，产生无α互补功能的N端片段，因此在带有外源DNA片段的细菌在含有IPTG/X-gal的培养基上呈白色。载体的概念及应具备的特征.载体：是携带靶DNA片段进入宿主细胞进行扩增和表达的运

7、载工具，本质为DNA。特征：①在宿主细胞中具有自主复制能力或能整合到宿主染色体上与基因组一同复制的能力②有合适的限制性酶切位点供外源DNA片段插入，多种酶单一位点使载体在使用上具有较大的灵活性③分子量不宜过大，以便于容纳较大的外源DNA片段并获得较高的拷贝数，也有利与体外重组操作④具有合适的筛选标记，以便区分阳性重组体和阴性重组体⑤配备与宿主相适应的调控元件。第四章核酸分子杂交技术1、核酸分子杂交的基本原理：利用核酸变性和复性的性质，使具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下按照碱基互补配对原则形

8、成异质双链的过程。2、核酸探针的概念：是指能与特定核苷酸序列发生特异性互补杂交，杂交后可用特殊方法检测的已知被标记的核酸分子3、核酸探针的种类：基因组DNA探针；cDNA探针；RNA探针；寡核苷酸探针4、变性：DNA变性是指在物理或化学因素的作用下，DNA分子互补碱基对之间的氢键断裂，使双链DNA分子变成两条单链DNA的过程。5、复性：在适当条件下，变性DNA的两条互补单链通过碱基互补配对原则重新缔合，形成双链的过程（又称杂交）6、随机引物标记法的原理：随机引物是人工合成的由6个核