GBT18649-2002 牛传染性胸膜肺炎(牛肺疫)诊断技术 - 下载地址.pdf

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1、GB/'r18649-2002前言牛肺疫是由丝状支原体丝状亚种(PG1)引起的一种牛属动物的传染病。健康牛和病牛接触由呼吸道吸人病牛的“飞沫”，是本病的主要传染方式和感染途径。暴发流行时多呈急性病演，呼吸系统症状非常明显，体温在41C以上稽留。但在病的常在地区多见亚急性和慢性病程，以地方流行性为特点。急性期病变为浆液渗出性纤维素性胸膜肺炎，肺间质多孔多汁，肺小叶出现各期肝变、多色，呈大理石样肺，肺胸膜和肋胸膜粘连，以及胸腔渗出液大量储留为特征。转为慢性后逐渐形成肺包膜或坏死块。慢性病牛长期带菌，成为隐蔽的传

2、染源。在新发的地区对此病的检验应采取流行病学、临床学、血清学、病理学和病原学综合诊断方法为宜。世界动物卫生组织[WorldOrganizationforAnimalHealth(英),OfficeIntentionaldesEpizootic(法)，OIE〕于1986年和1992年推荐采用稍加改进的Campbell和Turner的补体结合试验作为牛肺疫血清学诊断的方法，但常出现非特异性反应。新中国成立后一直采用补体结合试验检验牛肺疫，并于1979年将该法列人农业部颁布的《动物检疫操作规程》中，但这种方法常出

3、现1%-2%非特异性反应。近年来我国研制成功了特异性高的微量凝集反应检验方法，它不但降低了非特异性反应率，而且操作简便，容易判定，应用效果良好。病原学诊断主要取病牛肺脏，胸腔渗出液和肺门淋巴结接种马丁培养基，即可分离出牛肺疫病原体，此法对急性期病例的检出率可达100%.本标准的附录A、附录B、附录C、附录D,附录E都是标准的附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。本标准主要起草人:白文彬。中华人民共和国国家标准GB/T

4、18649-2002牛传染性胸膜肺炎(牛肺疫)诊断技术Diagnostictechniquesforcontagiousbovinepleuropneumonia，范围本标准规定了牛传染性胸膜肺炎的病原学检查、补体结合试验、微量凝集试验诊断技术要求。本标准适用于牛传染性胸膜肺炎的检验。病原学检查适用于急性、亚急性及慢性病牛分离病原体，补体结合试验和微量凝集试验适用于牛肺疫抗体的检测。2病原学检查2.1材料准备培养基:10%马血清马丁肉汤，10写马血清马丁琼脂〔见附录A(标准的附录)」。2.2病料采集2.2.

5、1用灭菌器械(剪刀、镊子、吸管、青霉素瓶等)无菌采集肺脏、胸腔渗出液、肺门淋巴结，并将肺病料剪成3cm-5em方块。胸部淋巴结，以整个淋巴结为好，胸腔渗出液用吸管吸人青霉素瓶内。2.2.2受检病料的保存:肺和淋巴结保存在用茶色广口瓶盛装的灭菌的40%50%甘油生理盐水中，胸腔渗出液不加任何保存液。病料均放人冰箱内保存，并应尽快送往实验室检验。2.3培养方法在无菌条件下剪肺病料或淋巴结小块，用铂金耳钓人10%马血清马丁肉汤内;胸腔渗出液用灭菌吸管吸取。1ml一。.3mL接种于马丁肉汤中即可。同时取剪碎病料小块

6、或直接取胸腔渗出液，用铂金耳在10%马血清马丁琼脂培养皿上划线接种，培养皿用胶布封口，置37'C-38'C培养，每天观察一次，5d-7d后判定。2.4结果判定2.4.1培养特征2.4.1门培养性状和菌落形态:牛肺疫病原微生物在10%马血清马丁肉汤内生长初期呈轻微混浊或呈白色点状、丝状生长，以后逐渐均匀混浊，半透明稍带乳光，不产生菌膜或沉淀，也无颗粒悬浮。在10%马血清马丁琼脂培养皿上生长迟缓，为极小的水滴状圆形略带灰色的微细菌落，中央有乳头状突起。菌落直径约0.2mm-0.5mm，小的不易看见，需用放大镜或

7、低倍显微镜观察。2.4-1.2染色镜检取马丁肉汤培养物涂片放温箱中干燥，后在酒精灯上轻微火焰固定，再用3写-50o铬酸蒸馏水溶液固定1min-2min，水洗，浸人用蒸馏水稀释的1，30的姬姆萨氏染液中染色，染片时染色缸放人普通冰箱内过夜，染色后取出用蒸馏水轻洗，自然干燥后用800-1000倍显微镜观察。菌形为多形态，以球点形最常见，大小在125nm-250nm,2.4.2生化特性2.4.2.1搪发酵试验2.4.2.1.1取蛋白陈水(PH7.8-8.0)100mL,氯化钠0.5g所需各种糖类0.5g-1.0g

8、a溶解各成分，加人1.600嗅甲酚紫酒精溶液指示剂0.1ml混匀，分装三分管内装2ml，管内装有倒置的小玻璃----一一一一一---一一-一一---一中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2002-02-19批准2002-05-01实施标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB/T18649-2002管(杜汉氏发酵管)。经106.4kPa20min灭菌。2.4.2.1.2在进行糖发酵试验时，首先将各种糖培养