发酵工业菌种

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1、第二章发酵工业菌种本章内容§1菌种筛选§2菌种改良一、常用的工业微生物二、发酵工业菌种分离筛选§1菌种筛选一、常用的工业微生物p131、细菌醋杆菌属的醋化醋杆菌、弱氧化醋杆菌乳酸杆菌枯草杆菌乳酸杆菌醋化醋杆菌枯草杆菌1、细菌丙酮丁醇梭菌大肠杆菌谷氨酸棒状杆菌丙酮丁醇梭菌谷氨酸棒状杆菌2、酵母菌酿酒酵母假丝酵母属产朊假丝酵母解脂假丝酵母热带假丝酵母毕赤酵母属、汉逊酵母属一、常用的工业微生物酿酒酵母热带假丝酵母热带假丝酵母产朊假丝酵母3、霉菌曲霉属米曲霉黑曲霉青霉属青霉菌：点青霉、产黄青霉桔青霉一、常用的工业微生

2、物青霉属产黄青霉曲霉属米曲霉黑曲霉3、霉菌根霉属:德氏根霉米根霉、小麦曲根霉红曲霉属紫红曲霉根霉属米根霉4、放线菌链霉菌属小单孢菌属地中海诺卡氏菌一、常用的工业微生物5、未培养微生物p14※定义：指迄今所采用的微生物纯培养分离及培养方法还未获得纯培养的微生物。其在自然环境微生物群落中占有非常高的比例，约为99％。一、常用的工业微生物二、发酵工业菌种分离筛选P15菌株分离：将混杂着各种微生物的样品按照实际需要和菌株的特性采取迅速、准确、有效的方法对它们进行分离、筛选，进而得到所需微生物的过程。※（一）、菌种选择

3、的要求p15培养基原料来源广、产物易回收发酵周期较短；条件易控制；抗病毒（噬菌体）、杂菌能力强；菌种不易变异退化；对放大设备的适应性强；菌种不是病原菌（二）、菌种分离的一般过程P15标本采集→预处理→富集培养→菌种分离（初筛、复筛）→发酵性能鉴定如何使样品中所含微生物的可能性大？如何在后续的操作中使这种可能性实现？目的：高效地获取一株高产目的产物的微生物问题：→菌种保藏1、样品的采集p15样品来源越广泛，获得新菌种的可能性越大。※采样时应注意的问题:A、土壤的有机质含量和通风状况B、土壤的酸碱度和植被状况C、

4、地理条件D、季节条件A、土壤的有机质含量和通风状况P16耕地、菜园、近郊土壤：土质通气保水性能好，微生物生长旺盛，数量多，尤其细菌和放线菌较多山坡上的森林土壤：有机质丰富，微生物生阴暗潮湿，适合霉菌和酵母菌生长沙土、贫瘠的土地：细菌数量少果园：树根土壤中酵母菌含量较高（偏酸）豆科植物根系土壤：根瘤菌较多B、土壤的酸碱度和植被状况腐殖土：霉菌较多油田土壤：分解石油的微生物较多自然环境中的天然菌群，可因人类的生产或生活而改变。如在土壤中加去莠津（2-氯-4-乙胺基-6-异丙胺基-1,3,5-三嗪），会导致放线菌群

5、的增加；在杀真菌剂存在下，诺卡氏菌属的菌更容易分离到。C、地理条件南方温度高、温暖季节长、雨水多、相对湿度高、植被覆盖面广、土壤有机质丰富：许多工业微生物菌种，如抗生素产生菌，尤其是霉菌、酵母菌，大都从南方获取北方：秋季采土样最为理想D、季节条件上节知识回顾一、常用的工业微生物二、发酵工业菌种分离筛选1、样品的采集A、土壤的有机质含量和通风状况B、土壤的酸碱度和植被状况C、地理条件D、季节条件采土样的方法南方：用取样铲，将表层5cm（阳光直射，蒸发量大水分少，而且受紫外线照射）左右的浮土除去，取5～25cm处

6、的土样10～25g，装入事先准备好的塑料袋内扎好。北方：土壤干燥，可在10～30cm处取样。给塑料袋编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。一般样品取回后应马上分离，以免微生物死亡。目的：提高菌种分离的效率。●物理方法：加热(55℃,6min；100℃,1h；40℃2-6h)、膜过滤法、离心法、空气搅拌法●化学方法：含1%几丁质培养基、用CaCO3提高pH值进行培养（链霉菌属）●诱饵法：用涂石蜡的棒置于碳源培养基中（诺卡氏菌）、花粉（游动放线菌）、蛇皮（小瓶菌属）、人头发（角质菌属）2、样品的

7、预处理p16富集的目的：让目的微生物在种群中占优势，使筛选变得可能。富集培养是在目的微生物含量较少时，根据微生物的生理特点，设计一种选择性培养基或创造有利生长条件，使目的微生物数量增加，由原来自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种，以利于分离得到所需要的菌株。3、富集培养p17富集的基本方法：1、控制营养：如以唯一碳源或氮源作底物；2、控制培养条件：如pH、温度、通气量等；3、抑制不需要的种类。富集培养方法：1、分批式富集培养（P17）：指将富集培养物转接到新的同一种培养基中，重新建立选择性压力，如此重复几

8、次后，再取此富集培养物接种至固体培养基上，以获得单菌落。转种是关键。2、连续培养（P17）：通过改变限制性基质浓度，来控制两类不同菌株的比生长速率。3、半连续培养（P18）：即分批补料培养4、菌种分离P18从产物角度出发在培养时以产物的形成有目的的设计培养基；利用简单、快速的鉴定方法，如抗生素。从形态的角度菌落的外观形态，是微生物的一个重要表征。如多糖产生菌在适当的培养基上生长，从具有粘液性的菌落外