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1、低浓度异氟醛吸入对小鼠生殖生理的影响王龙才1张岩2张成明1舒蕤1(1潍坊医学院山东潍坊261053；2潍坊医学院附属医院山东潍坊261053)【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2012)4-0085-03【摘要】目的木实验通过观测不同浓度异氟醋对激素诱导下小鼠排卵的影响，麻醉气体对小鼠妊娠的影响，观测异氟瞇对细胞间粘附分子J、MMP-9的影响,进而探讨麻醉气体对小鼠牛殖的影响。方法长期低浓度异氟醋吸入。激素诱导后，采用镜下压片法计数小鼠排卵数。解剖孕18天小鼠观察产仔数、幼仔
2、体重、身长。采用免疫组织化学检测小鼠子宫内膜中细胞间粘附分子的表达。结果吸入不同浓度异氟醴的小鼠排卵数与对照组之间的差异无统计学意义(P>；0.05)o吸入0.1%异氟醯的小鼠妊娠产仔数与对照组相比数量下降(P<0.05),小鼠幼仔体重身长与对照组相比无差异(P>0.05)o免疫组织化学检测显示吸入异氟醯组子宫内膜中细胞间粘附分子-l>MMP-9的表达少于对照组(P<0.05)o【关键词】异氟醸生殖免疫组化细胞间粘附分子JMMP-9木研究通过模拟手术室中低浓度麻醉废气，观测低浓度麻醉气体对
3、女性牛殖系统的影响，并探讨其产生地机制。1材料和方法1.1实验动物六周龄昆明小鼠(山东中医药大学动物实验中心提供)。1.2主要试剂和材料异氟醯、孕马血清促性腺激素、绒毛膜促性腺激素、免疫组织化学试剂及药品。2方法2.1采用统计软件SAS9.02进行随机化，将40只六周龄雌性小鼠随机分为ABCDE组。将ABCD四组小鼠分别置入体积1.5m2,底部垫有钠石灰的密闭箱内。根据吸入麻醉药的理化性质(每毫升液态异氟隴可产生196ml气体)计算岀保持箱内异氟酬浓度为0.003%0.03%0.06%0.1%所需液态异氟噬的量
4、，并用注射器抽取异氟醯注入放有小鼠的密闭箱内。每天让ABCD四组小鼠分别吸入上述浓度异氟隴8小时。E组放入无麻醉气体的同种箱中每天8小时。持续30天后，于16吋腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)IOU/只，48小时后腹腔注射绒毛膜促性腺激素(HCG)10U/只。HCG注射后次日9・10时脱颈椎处死小鼠，咅IJ腹取出双侧输卵管、子宫及卵巢，放入盛有少量生理盐水的培养皿中。在解剖显微镜下分离出输卵管，用压片法将输卵管壶腹部压平展开。在显微镜下观察输卵管壶腹中的卵母细胞，计数并记录。2.2将六周龄昆明雌性小鼠16
5、只分为实验组和对照组。实验组小鼠在与性成熟雄鼠合笼前30天开始吸入0.1%异氟毬。对照组除不吸入异氟秘外其他饲养条件同实验组。30天后雌雄小鼠按1：1合笼。合笼后于每日晨6吋观察阴栓，出现阴栓计为孕0.5天。孕后继续吸入0.1%异氟联至孕18天。剖腹取岀胚胎和子宫，检查胚胎有无畸形异常，计数胚胎数量。使用电子称称量鼠仔体重，使用游标卡尺测量鼠仔体长并记录。2.3将六周龄雌性昆明小鼠16只分为实验组和对照组。实验组小鼠在与性成熟雄鼠合笼前30天开始吸入0.1%异氟毬。对照组除不吸入异氟秘外其他饲养条件同实验组。3
6、0天后雌雄小鼠按1：1合笼。合笼后于每日晨6吋观察阴栓，出现阴栓计为孕0.5天。孕后继续吸入0.1%异氟毬至孕5.5天。剖腹取出小鼠子宫，将组织置于10%中性甲醛固定24-48小时•。严格按照免疫组织化学ElivisionTM法染色具体步骤如下：1,组织从固定液中取出，流水冲洗1・2小吋。2,脱水:70%酒精一80%洒精一95%I-95%II-无水乙醇1—无水乙醇II,各浓度酒精浸泡30min-lho3,透明：彻底脫水后的组织经二甲苯I—二甲苯II,各浸泡30mino4,浸蜡：完全透明的组织放入56—58摄氏度
7、右蜡中2—3h.5,包埋：被切面向下包埋于石蜡中，冷却后成蜡块。(常'温保存)6,切片：旋转式切片机将石蜡切成5—10um薄片，贴在珞矶胶处理的载玻片上。乙58-60摄氏度烤片2—4小时。8,脱蜡入水，二甲苯I20min一二甲苯II20min一无水乙醇IlOmin一无水乙醇IllOmin—95%乙醇I5min—95%乙醇Il5min—80%乙醇3min—70%乙醇3min—蒸镭水5min,9,免疫组织化学染色：3%H2O2离子水孵育15min,O.OlmPBS冲洗，5min×3mino柠檬酸盐抗原修
8、复(92—96°C,15min,低火)，PBS冲洗，5min×3次。滴加一抗，室温1一2h〃4°C过夜，PBS冲洗，5min×3次。滴加试剂1,室温10—20min(15min),PBS冲洗，5min×3次。滴加试剂2,室温10一20min(15min),PBS冲洗，5min×3次。DAB显色：双蒸水lml+A混匀，然后加B,C各一滴，再
