浅谈提取植物组织RNA的准备工作和操作规范

《浅谈提取植物组织RNA的准备工作和操作规范》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、浅谈提取RNA前的准备工作1、提取RNA操作全程及配制RNA提取试剂必须穿实验服，戴口罩和一次性手套,触摸皮肤(例如面部)、门把手及实验室其他未处理过RNase的普通物体表面后立即更换手套。2、器具干烤：需耍干烤的器具包括金展和玻璃制品，如研钵、钥匙、蹑子、剪刀、试剂瓶(200mL.500mL、1L)、量筒(50mL、lOOmL)、烧杯，即所有在配制RNA提取试剂过程中需要用到的玻璃器皿均需要干烤处理。所有干烤的器具均用锡箔纸包住，如研钵、钥匙、蹑子、剪刀和匀浆器，容器用锡箔纸封口，如试剂瓶、量筒和烧杯。180°C干烤6h后放入RNA专用柜中备用。3、DEPC水的处理:用

2、于处理枪头、试剂瓶盖和离心管等塑料制品的0.1%的DEPC水可以在烧杯中配制，磁力搅拌器上搅拌过夜,搅拌过程中用锡箔纸封口。用于配制RNA提取试剂的DEPC水需要在干烤过的试剂瓶中配制，盖上瓶盖搅拌过夜后121°C灭菌20mino4、枪头、离心管和试剂瓶盖用0.1%DEPC水过夜处理后用报纸包好高温灭菌，移液器必须是专用的，用之前用DEPC处理的水配制的75%酒精擦拭整个移液器，特别是枪杆。超净台的处理:用DRPC处理的水配制的75%酒精擦拭干净后，用氯仿快速擦拭，再用75%酒精擦拭，将提取所需的物品放入超净台，并用75%酒精擦拭,另放置一个废物缸，表面喷酒精，上述完成后

3、，超净工作台紫外灯照射15-20min。试剂配制过程中所用的枪头也必须是DEPC水处理过并高温灭菌的。5、提取过程中用新开封的氯仿和界丙醇，用DEPC水处理过的15讥离心管分装,每管分装10mL并于4°C保存，最后溶解RNA沉淀的DEPC处理过的水用处理过的1.5mL离心管分装并于-20°C保存。6、用专用的电泳槽电泳RNA,用DEPC处理的水配制50XTAE缓冲液，每次电泳前用DEPC处理的水配制1XTAE缓冲液进行电泳，电泳前用去污剂将电泳槽、制胶板和梳子清洗干净,DEPC水配制的75%乙醇擦拭,最后用DEPC处理的水冲洗干净。提取植物组织RNA的操作步骤1＞将RNa

4、se-free的离心管用银子在超净台中取出并加入ImLtrizol置于冰上,将新鲜采集的植物幼叶用烘烤过的研钵在液氮环境下快速研磨成粉末，此过程屮用到的剪刀、钥匙和银子均是经过烘烤处理的。研磨速度要快，一个样品尽量在lmin内研磨完全，必须在液氮或低温下进行，将粉末加入trizol屮后迅速在震荡仪上振荡20s,室温卜放置5mirio2、加入200uL的氯仿，盖紧离心管盖,用手剧烈震摇30s,室温放置lOmino3.12000rpm,4°C离心15min,此时溶液分为三层,上层的水相，中间的DNA沉淀和下层的有机相，小心缓慢吸取上层水相至新的离心管中，上清可以不用吸干净，但

5、是-定不要吸到中间层和下层。吸取上清的时候换新的手套。4^加入等体积的界丙醇颠倒混匀后室温放置10min,12000rpm,4°C离心lOmino5、小心地倒掉上清，用lmL75%的乙醇洗涤沉淀。洗涤的过程可以用手指轻弹离心管，尽量将沉淀弹起，并上下颠倒，使整个离心管内部被充分洗涤。6、12000rpm,4°C离心5min,重复洗涤一次，将上清液尽量吸干后室温干燥2-3mino7、加入20-50uLDEPC处理的水溶解RNA沉淀。8、用0.1%的琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性,200V电泳10mino9、RNA的保存：电泳检测吋先将RNA溶液保存于-40°C,待电泳结束

6、后根据实验需要决定是否保存RNA,若需保存则将样品先用液氮速冻后用封口袋装好，于封口袋上标明日期和样甜名称冻存于-80°Co操作过程中的注意事项1、研磨之前事先将研钵预冷，研磨过程中杵棒和研钵不耍碰到其他未处理过RNase的物体。在转移粉末至离心管中时速度一定要快，不能让粉末吸收空气中的水分而受潮,以防止被空气中的RNase降解。2、在超净台中操作时每次需要用DEPC水配制的75%酒精擦拭手及新放入超净台中的物品,操作过程中不能将皮肤任何地方暴露在超净台中。3、吸取试剂时，枪杆不能插入试剂瓶中，慢吸慢打，吸取液体后的枪不能平放。插好的枪头若碰到了其他地方必须重新换枪头，用

7、枪加样时必须悬空加，以免造成污染。4、整个操作过程尽量快，操作过程中不能用手套、枪杆或其他物体碰到离心管口及内部，以免造成污染。