鱿鱼墨多肽对PC-3细胞的增殖抑制研究【开题报告】

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1、毕业设计开题报告药学鱿鱼墨多肽对PC-3细胞的增殖抑制研究一、综述本课题国内外研究动是态，说明选题的依据和意义鱿鱼（Squid）也称中国枪乌贼,属软体动物门头足纲,广泛分布于太平洋、大西洋等海区[1]。鱿鱼的营养价值丰富,富含人体必需的多种氨基酸，且必需氨基酸的组成接近全价蛋白,有滋阴养胃、补虚润肤的功能，且富含钙、磷、铁元素，利于骨骼发育和造血，能有效治疗贫血，其所含多肽和硒有抗病毒、抗射线作用[2]。海产品是我国重要的农副产品资源，近年来海洋资源逐渐备受关注。海洋捕捞的鱿鱼及其他低值鱼的产量呈上升趋势；由于技术上的落后,一些下脚料利用不充分，甚至作为废

2、弃物直接丢弃,导致资源浪费并污染环境，因此，国内外有不少科研院校和企业单位正在研究和开发鱿鱼加工副产物中的生物活性物质[3]。鱿鱼墨（Squidink）是加工鱿鱼时产生的下脚料，一般将其做废弃处理，这不但浪费资源，而且污染环境[4]。鱿鱼墨主要化学成分是黑色素和蛋白多糖复合体[5]。研究表明鱿鱼墨具有抗肿瘤、调节机体免疫功能、诱导多种细胞因子等生理活性，并一直认为其主要的活性成分为多肽片断、酸性多糖、酪氨酸酶以及微量元素[6]。有报道指出鱿鱼墨中肽聚糖可以直接抑制肿瘤的生长也可以刺激机体的免疫应答间接抑制肿瘤的生长，而肽聚糖中的主要成分是蛋白[7]。前列腺

3、癌(ProstateCancer,PCa)为老年病，前列腺癌的发病率在国内外有很大差别。欧美各国发病率较高，东方发病率比较低。但是，近几年，在我国的发病率有上升的趋势。据估计，50岁以上的男性当中，大约有40%的人前列腺中都患有很小面积的癌症。然而，只有8%的男性将临床地发展为值得注意的疾病，只有3%将死于这种病。自1983年Mosman用MTT比色法检测存活细胞和细胞增殖以来，该方法已广泛用于细胞毒性试验，一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物的筛选以及肿瘤放射敏感性测定等。在一定浓度下，MTT能透过质膜被活细胞线粒体膜上的琥珀酸脱氢酶还原成蓝紫

4、色甲瓒结晶并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。由于结晶物形成的量与细胞数量及代谢活性成比例，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞的数量[8]。3MTT比色法作用原理是可溶性的四氮唑蓝（Tetrazoliumsalt,MTT）在活细胞的线粒体脱氢酶的参与下被还原为难溶性的蓝紫色结晶物甲瓒（formazan）并沉积在细胞中此作用随细胞的死亡而丧失。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，通过自动酶标仪测定光密度OD（Optical，densityOD）值（或称吸光度A值）的变化可直接反映肿瘤细胞的存活率。HE染色是形态组织病理学最

5、常用的、必不可少的普通染色，在医学领域的教学、医疗和科研工作中有着重要的作用[9]。二、研究的基本内容，拟解决的主要问题：1.根据单因素正交试验确定酸解制备鱿鱼墨多肽工艺条件。在酸条件下提取鱿鱼墨多肽，对酸的种类、酸提料液比、酸解时间、酸解温度四因素进行优化，得到最优条件。2.在已得出的最优酸化提取条件下，提取鱿鱼墨多肽。3.用MTT比色法检测细胞增殖情况，对鱿鱼墨多肽作用于PC-3细胞进行分析。4.用HE染色法制作HE玻片对鱿鱼墨多肽作用下的PC-3细胞进行组织学分析。三、研究步骤、方法及措施：1.查阅文献资料；掌握实验中所用到的各种仪器和设备的操作要领

6、及注意事项；熟记各种试剂的注意事项。2.准备实验相关的器材和试剂。3.1.根据单因素试验设计正交试验确定酸解制备鱿鱼墨多肽的工艺条件。在酸化条件下提取鱿鱼墨多肽，用电位滴定法测定鱿鱼墨多肽中的氮含量，对酸的种类、酸提料液比、酸解时间、酸解温度四个因素进行优化，得到最优条件。3.2.在已得出的最优酸化提取条件下，提取鱿鱼墨多肽。3.3.培养PC-3细胞，定量分析鱿鱼墨多肽对PC-3细胞的抑制作用。3.4.用MTT比色法技术检测鱿鱼墨多肽抗前列腺癌PC-3细胞的增值抑制率。3.5.用HE染色法制作常规HE染色玻片进行形态学分析。4.实验结果的处理和论文的撰写。

7、四、参考文献[1]欧阳高亮,李祺福,田长海.海洋生物抗肿瘤活性物质及其作用机理研究进展[J].海洋科学,2003,27(7):21～24.3[2]王杏珠.日本乌贼墨的开发和利用[J].海洋信息,1995,(12):15.[3]陈士国，薛长湖．薛勇，等．鱿鱼墨黑色素的自由基清除活性研究[J]．中国海洋药物，2007，26(1)：24～27．[4]郑高利，张信岳．周彦钢．鱿鱼墨和乌贼墨部分成分及微量元素含量比较[J]．中国海洋药物，2002，87(3)：12～14．[5]刘淑萍.乌贼墨抗肿瘤作用研究进展[J].中国肿瘤,2005,[6]章建设,雷晓凌.鱿鱼内脏

8、糖蛋白提取工艺及其免疫活性初步研究[J].现代食品科技,2008,