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《胡桃楸茎皮POD同工酶表达研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、胡桃楸茎皮POD同工酶表达研究摘要：本文对胡桃楸茎皮的生长期及休眠期5〜11月过氧化物酶(POD)同工酶进行测定分析，结果显示：胡桃楸茎皮POD同工酶表达丰富，酶活性强，酶带清晰稳定;茎皮POD同工酶表达具阶段特异性；同工酶分析适合采用茎皮部；试验结果为进一步探索次生代谢产物积累与POD活性大小及同工酶谱带数的消长关系，为核桃楸药源的合理、高效开发提供生化参考依据。关键词：胡桃楸茎皮；POD；同工酶中图分类号：R284.1文献标识码：A胡桃楸(JuglansMandshuricaMaxim)又名山核桃、核桃楸、胡桃、小核桃等，为胡桃科胡桃属落叶乔木。为珍贵
2、用材，也是著名的药用植物。目前，有关胡桃楸茎皮药效及药用成分研究的报道较多，且偏重于其抗性研究，而对胡桃楸POD同工酶的研究较少。本试验通过对胡桃楸茎皮的POD同工酶进行生长期比较和分析，旨在揭示胡桃楸同工酶谱带的变化规律，为更好地了解山核桃生长期特点，探讨山核桃生理代谢、发育特点与同工酶谱带的关系，为促进胡桃楸食药用开发利用提供生化水平参考。并试图为进一步探讨药用次生代谢产物的生成与POD活性大小及同工酶谱带数的消长关系，为探索胡桃楸药源不同生长发育期的特征提供相应的检测生化指标。1试验材料供试材料胡桃楸取自黑龙江省佳木斯市四丰山生长结实较好的成片山核桃
3、林，于2012年5〜11月，每月中旬采集胡桃楸成年树种的大致相同部位的茎皮，冰盒保存，尽快带回实验室备用。2试验方法2.1样品制备将胡桃楸茎皮用清水洗净，蒸憎水漂洗，滤纸吸干后称重，每克鲜重加4mL提取液（pH7.2的蔗糖一磷酸缓冲液），冰浴下研磨呈匀浆状，4层纱布过滤，将滤液3800r/min离心15min,上清液（样品）置于冰箱（-20°C）备用。2.2电泳采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳方法，分离胶浓度7.5%,浓缩胶浓度3.5%o4°C恒压（350V）电泳，电极缓冲液为pH值8.3Tris-Gly系统。样品点样量均为15卩1,电泳重复2次。2.3染色及
4、迁移率（Rf）的测定采用醋酸联苯胺法染POD,待酶带显现清晰后，用流水漂洗后置蒸馆水中保存，Rf测定按照张相歧的方法见参考文献。2.4凝胶板的保存用10%甘油浸泡玻璃纸8h以上，然后在玻璃板上先放1张玻璃纸铺平，其上放凝胶，凝胶上再放1张玻璃纸，排除玻璃纸与凝胶间的气泡，阴干、保存，以备考证。3结果与讨论3.1结果与分析根据供试胡桃楸7个样品的电泳图谱，绘制模式图并拍照（见图1）。从电泳图谱可见，5〜11月，7个样品共显现18条酶带。依染色深浅区分为特强带、强带、次强带、弱带和痕迹带5个级别。为了分析方便，从负极到正极划分为A、B.C3个区，A区Rf二0〜
5、0.50,显现4条酶带A1〜A4,Rf分别是A1二0.41、A2二0.43、A3二0.46,A4=0.50；B区Rf=0.51〜0.70,共显现10条酶带B1-B10,Rf分别是Bl=0.53.B2=0・54、B3二0.58、B4二0.60、B5二0.61、B6二0.64、E7二0.67、B8二0.68、B9二0.69、B10二0.70；C区Rf二0・71〜1.0,共显现4条酶带C1〜C4,Rf分别是C1二0.72、C2=0・73、C3二0.78、C4=0.81o从酶带显示的数目看，5月显示15条酶带，6月显示16条酶带，7月、9月、10月显示14条酶带，
6、8月显示13条酶带，11月显示11条酶带。可见5〜11月胡桃楸各生长时期茎皮中P0D酶带数变化不大。5月天气渐暖，胡桃楸开始萌芽，此时期属于休眠转入生长期阶段，因此5月为胡桃楸萌芽期，6月为旺盛生长期，所以酶带数最多，分别工酶表达较稳定，10月天气转寒，胡桃楸叶片脱落，此时期属于生长转入休眠期阶段，11月胡桃楸进入休眠期，茎皮的POD同工酶表达的酶带数减少较多，表达11条酶带，且活性较低，几乎均为弱带和痕迹带。为15条和16条,7〜10月,酶带数略减少,这4个月中同胡桃楸茎皮POD同工酶5〜11月均较丰富，活性均较强,有9条酶带始终表达,分别为Al、A2、
7、A3、A4、B2、B5、B6、B7、C3等9条酶带，且都大致表现为5〜10月活性较强而稳定，而11月下降较大。B9酶带与上述9条酶带表达特点相似，5〜10月均表达，活性较低，为弱带和痕迹带，11月表达停止，酶带消失。同时，在胡桃楸茎皮同工酶表达谱中，有4条酶带的表达具典型特点，即Bl、B3、B4、B8等4条酶带。其中B1酶带只5月和10月特异表达；B3、B8酶带7月、8月不表达，而B4酶带只7月、8月特异表达。3.2讨论3.2.1胡桃楸茎皮部POD同工酶表达丰富，活性强从试验所得酶谱可见，5〜11月，胡桃楸茎皮POD同工酶表达丰富，尤其在生长期内，POD酶
8、活性强，酶带清晰稳定，而休眠期POD酶活性大大下降，表达的POD同
