兽医药理及毒理学（王志强）药理研究性教学

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1、“兽医药理学”研究性教学方案动检0904第二大组方案目的：了解并掌握临床细菌疾病病原的分离，鉴定及药敏试验方法，为临床选择治疗药物提供基础•二・实施步骤1•寻找临床病例，采集病料，病例备案23•病原鉴定252•病原分离培养4•纸片法药敏试验5•测定MIC6•棋盘法进行联合药敏试验三•总结及汇报病料米集:待检材料的处理无菌采集的病料不经处理可直接用于分离；污染较严重的病料，接种前必须经过处理方可进行分离培养。(1)加热处理法当怀疑病原菌为芽胞菌时，可加入5T0倍灭菌生理盐水研磨(液体病料除外)，75°C水浴30min(或80°C15-20min),可杀死细菌繁殖体(包括杂菌及病原菌)；然

2、后将处理过的病料接种到适当的培养基上。(2)接种易感动物把病料接种易感动物，待其发病死亡后，取其血液或组织器官，接种到培养基上。利用此方法不但可以从污染的材料中分离出病原菌，而且还可以确定病原菌的毒力。(3)化学药品处理有些化学药品对某些细菌有极强的抑制力，而对另一些细菌则没有抑制作用或很小。因此可将适宜的化学药品加入培养基中。如龙胆紫则可抑制许多G+菌的繁殖，有利于G—菌的分离培养;病原分离培养：一*培养基的制备一、制作要求:1•含各种营养物质和水分2.适宜的pH和渗透压3.不应含有抑制细菌生长的物质4.应均质透明,应彻底灭5.对某些微生物必须提供一些特殊物质二、制备过程:1•配方的

3、选定2.成分的称取、混合和溶化3.培养皿的清洗与灭4.过滤与分装5.灭菌与保存6.做好记录三、实验材料：1•量杯(500mL)、玻璃棒、漏斗、试管、玻璃瓶等；2.pH试纸、纱布、脱脂棉、包装纸、扎线等；3.牛肉膏、蛋白月东、氯化钠、磷酸氢二钾、琼脂、蒸f留水、0.1mo1/LNaOH、0.1mo1/LHCI等。(1)常用配方:牛肉膏3-5g蛋白月东10g氯化钠5g磷酸氢二钾0.5g蒸憎水1OOOmL(2)配置方法：1.取水350mL,加热；!1!、实验步骤：1.普通肉汤的制备:2.按照配方称取各成分加入水中，边加热边搅拌，快沸时注意不要溢出，沸腾后停止加热；冷却至室温；3•用pH试纸测

4、定pH并调至7.2-7.6o•若pH<7.2,则用0.1mol/LNaOH调高.•若pH>7.6,则用0.1mo1/LHCI调低；4.调好pH值后，补足水量至500mL；再次测定pH值后，过滤2•普通琼脂培养基的制备：配方：(1)普通肉汤500mL(2)琼脂8-10g配置方法：(1)取普通肉汤400mL于500mL瓶中(2)加入琼脂(3)加一定量的水，不断搅拌直至琼脂完全溶化。(4)加水至500mL(5)灭菌倒入平皿，制成琼脂平板培养基。2.麦康凯琼脂培养基的制备:配方：(1)麦康凯27g(2)琼脂8-10g(3)蒸f留水500mL配置方法:(1)取麦康凯粉于500mL瓶中(2)加入琼

5、脂(3)加一定量的水，不断搅拌直至完全溶化。(4)加水至500mL(5)灭菌倒入平皿，制成麦康凯平板培养基。3.鲜血琼脂培养基的制备：配方：(1)普通肉汤500mL(2)琼脂10g(3)家兔鲜血配置方法：(1)~(4)同上(5)将灭菌的普通琼脂培养基加热融化，待冷却至50°C,加入鲜血5%(即每100niL普通琼脂加入鲜血5-6mL)混合后，分装入试管迅速摆成斜面，倒入平皿，制成鲜血平板培养基。2.高压灭菌：(1)将所有要高压的物品整齐的摆放在高灭锅内;(2)盖好压力盖，关闭放气孔，接通电源；(3)压力达到0.05MPa时，关闭电源缓慢放气至压力为0,接通电源;再重复放气1次；(4)维

6、持121°C,15-20min二、细菌分离培养一、实验材料1.常规接种工具:接种棒、灭菌棉签、伽L吸管、酒精灯等2.的培养肉汤和平板培养基3.培养基:普通平板、普通肉汤、琼脂斜面二、实验内容1.平板划线：以左手持平板，中指、无名指和小指托着平板底，拇指和食指打开上盖，使盖与底成30。角，以便划线。右手握接种环，先灭菌钳丝部分，待丝烧红后，再于火焰上灭菌金属棒部分。把接种坏上的病料涂在培养基一侧，一般作5-8次划线。将环上的多余细菌材料烧掉后，从第1次划线引岀第2次划线；再从第2次划线引出第3次划线，如此反复3-4次划线后，即可把整个平板表面划满，注意每一次划线只能与上一次划线重叠，这样

7、就可在最后的-2次划线上出现多数单个落，以便进行纯培养。2•琼脂斜面接种，37°C培养，并保存菌种3.普通肉汤接种三、观察结果37°C培养24小时后观察细在琼脂平板、斜面、肉汤中的生长表现病原鉴定:细菌鉴定1.一、实验材料的平板培养物。2•常规接种工具、革兰氏染色液、玻片、蒸憎水、液状石蜡、显微镜等3.生化管：葡萄糖、乳糖、鸟氨酸、赖氨酸、H2S、尿素、枸橡酸盐、苯丙氨酸、靛基质、卫茅醇、氨对4.试剂：V-P试剂、M.R试剂、苯丙氨酸试剂等二、