Rainin产品在qPCR中的应用

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1、qpcRRainin产品在qPCR中的应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)应用范围：现已普遍应用于临床及牛命科学研究的各个领域屮。在科研方面可尬量分析各种基因的表达分析，基因突变和多态性分析，单核苛酸多态SNP测定及易位基因的检测；在医疗方面可用于免疫组化分析、临床疾病早期诊断、病原体检测、耐药性分析、肿瘤微小残留病变研究等。据不完全统计相关国家标准强制要川QPCR仪进行检测：《GB/T194380.1-2004您流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》《SN/T1632.3-2005奶粉屮阪崎肠杆菌检验方法：荧光PCR方法》《SN/T1870-2007食品中致病菌

2、检测方法：实时PCR法》《GBT21105-2007动物源性饲料屮狗源性成分立性检测方法PCR方方法》《GBT21102-2007动物源性饲料中兔源性成分定性检测方法实时荧光PCR方法》《GBT19915.8-2005猪链球菌2型毒力因子荧光PCR检测方法》《GBT19495.4-2004转基因产品检测核酸定性PCR检测方法》《SNT1686-2005新城疫病毒中强毒株检测方法荧光RT-PCR法》«SN0169-1992出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》qPCR实验的特点1.在进行相对定量分析的时候，如果每次参照物模板的加入量和样品加入量产生巨大差异

3、，会导致分析时的基因表达比差异。2.在无法使用内参的时候，基因表达的差异就会归结到所有加入的RNA数量上，因此，加入准确的RNA数量会直接影响到内参基因的选择。3.在完成大量PCR加样吋，如96孔板，过长的加样过程会导致样品的蒸发，从而影响后期实验。4.QPCR对于每次反应的模板数量极为灵敏，细小的定量差别也会导致后期数据分析中产生巨大偏差，从而导致实验失败总而言之移液的准确性粘:确度对qPCR十分重耍！RAIN[NqPCR实验常见的问题一:重现性不好：ittsnatm»3$V•可能的原因：移液操作失误样品挥发Rainin解决力■案：>熟悉实验方案，加样方案烂熟于心

4、>根据加样习惯，使用电动单道或者多道移液器电动移液器的优势：1.使用连续分配功能，吸液一次即可连续分液多次，提高效率，避免试剂在室温下由于暴露时间过长而挥发。2.使用连续分配功能，屏幕可显示已分配次数，即便实验过程有人打扰，也不会多加或者漏加。3.电动步进马达控制加液量，一旦设定好后，不受操作手法影响，保证每次加样的一致性。4.避免频繁吸/排液需耍的拇指用力，缓解手部疲劳。Rainin多道移液器优势：1.LTS圆柱形套柄，不需敲或者左右摇晃即可上紧吸头，且上紧吸头的瞬间使用者能明显感觉到吸头被插进去了，也就是吸头到了套柄前挡点的位置。不仅节约上吸头时间而且可保证每次

5、吸头插入位置都一样，密封性都一致。2.LTS轻触去吸头系统，可降低退吸头力达85%,大大缓解使用者手部疲劳，减小由于手部疲劳造成的移液误差。2.套柄外壁无O形圈设计，不会产生由于反复摩擦造成O形圈磨损从而导致各道密封性能差异，甚至O形圈碎渣掉入样品造成污染。qpcR选择单道还是多道移液器关键要看实验者的实验设计，若为整排加样可选择排枪，若单独加样本，且平行样不是一整排则还是用单道电动方便。有些品牌多道移液器有O形环RaininLTS多道无O形环qPCR实验常见的问题二：55°Cboo000006600OOOOOO0OO000bOOOOOOOOOOOPoOOOOOOO

6、€)000000oonooooOOOQOOOoaooooooSoo.OOOOOOOOOOQ••rr.•产r・•产r.•疔•疔普通PCR板在循环过程中可扩大达2mmo升温退火过程造成PCR板变形，同时热封膜或粘封膜对冷热的变化不如PCR板敏感，不会随板的变化而变化，造成膜密封性下降，尤其是角落处特别容易变松甚至翘开，最终造成试剂挥发甚至影响实验结果。qPCR所用的试剂很昂贵，一般花费在$50to$150/plate,如果能减少挥发意味着可以加更少量的试剂，则一年下来能为实验室节省不少经费。Rainin解决方案：>使用Framestar二元板何为二元板？二元板顾名思义就

7、是两种材质做成的板子。两种材料分别为对热敏感的聚丙烯（孔）和对温度不敏感的聚碳酸酯（框架）。二元板的优势：1.在循环过程中不会变形，将试剂样品挥发量控制到最低。2.孔采用薄壁设计，加快热传导，加快反应速度，保证实验结果的一致性。-Roche►LC480■KeyqPCRinstruments・ABI(LifeTechnologies)►7500.7900»Step-One・Stratagene(Agilent)►Mx3000,4000・BioRad►CFX96»MJResearch・Eppendorf»Mastercycler