2018课时分层集训38

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1、课时分层集训训（三十八）（建议用时：45分钟）（对应学生用书第337页）A组基础达标1.图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspI、BamHI、MboI、SmaI4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为CICGG、GGATCC、IGATC、CCCIGGG。请回答下歹U问题。冃的棊因D11111丨111厂GGATCCCCTAGGn1uh111rqgGGGGIOGCCC~l丨11111「一CCCGGGGGCCCC

2、CCTAGG111111111L.-iiimimil-」111111L1111111111534bp…•卜心796bp小二658bp⑴图1的一条脫氧核营酸链中相邻两个碱基之间依次由连接。（2）若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段，产生的末端是末端，其产物长度为（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶S/gI完全切割，产物中共有种不同长度的DNA片段。（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，

3、形成重组质粒，那么应选用的限制酶是o在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是［解析］(1)题干中强调“一条脱氧核昔酸链中相邻两个碱基”，可通过画出DNA结构示意图解决。(2)S/dI识别并切割的序列为CCCIGGG,所以产生的末端为平末端，经丨切割后，DNA片段会形成三个小的DNA片段，按切割位点算分别是:534+3=537(bp);796—3—3=790(bp);658+3=661

4、(bp)。(3)用Smz丨切割基因D,会形成537bp、790bp、661bp三种类型。题图1中虚线方框内C・G被T・A替换，失去了一个酶切位点，则会被切割成534+796—3=1327(bp)和658+3=661(bp)两种类型。所以一共会得到537bp、790bp、1327bp、661bp4种类型的片段。(4)根据基因D和质粒的核昔酸序列可知，可选用BenHI和MboI进行切割，但MboI会破坏掉两种抗生素抗性基因，因此只能用BamHI进行切割。［答案］(1)脫氧核糖、磷酸、脱氧核糖(2)平537b

5、p、790bp、661bp(3)4⑷BamHI抗生素B同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接1.(2017-江苏高考)金屈硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金屈结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题:【导学号：41780170］模板DNA引物1引*2c=3ca55P步E20372T步・394、：第：伦WI环-CQ55X步・2⑴从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA,通过获

6、得用于PCR扩增。(2)设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2),为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的位点。设计引物时需耍避免引物Z间形成,而造成引物自连。(3)图中步骤1代表,步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。(4)PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但的引物需要设定更高的退火温度。(5)如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有(填序号：①升高退火温度②降低

7、退火温度③重新设计引物)。［解析］本题主要考查目的基因的获取及PCR技术的有关知识。(1)依据题中表述现象分析，mRNA合成目的基因的过程应为逆转录过程，由mRNA直接逆转录形成的DNA为cDNAo(2)构建重组质粒时需要限制酶和DNA连接酶，因此推测在引物中需要增加适当的限制酶识别的位点。设计引物时需要注意避免引物1和引物2之间形成碱基互补配对。(3)图中步骤1代表变性。(4)退火温度过高会破坏引物与模板链之间的碱基互补配对。由于含G/C碱基对多的DNA稳定性强，因此在PCRit程中设置的温度应视G/

8、C的含量而定。(5)温度过高不利于引物与模板结合；引物设计不合理也会影响PCR扩增反应。［答案］(1)逆转录cDNA(2)限制性核酸内切酶碱基互补配对(3)变性(4)引物与模板GC含量高(5)②③1.(2016天津高考)人血清白蛋白(HSA)具有重耍的医用价值，只能从人血浆屮制备。下图是以基因工程技术获取重组HSA(rHSA)的两条途径。(1)为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取合成总cDNA,然后以cDNA为模板，使用PCR技术扩增