2017-2018学年高中生物专题2微生物的培养与应用课题3分解纤维素的微生物的分离练

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1、课题3分解纤维素的微生物的分1-纤维素酶是复合酶，包括G酶、G酶和葡萄糖苗酶等纣分。2.纤维索酶的作用：纤维索&酶和°呼纤维二糖葡萄糖艸关键语句葡萄糖。3.刚來红与纤维索形成红色复合物。当纤维索被分解后,―垸养基中矣出现婪發素分解•菌为中心的诱明圈n4.分离分解纤维素的微生物的实验流程样一选择烙样品涂布到鉴别纤维素分解菌年透明圈的菌落。知识点二纤维素陋及纤维素分解菌的筛选［口读教材•夯基础］1.纤维索(1)基本组成单位：衙萄糖。(2)含量：是地球上最丰富的多糖类物质。(3)分布：棉花是口然界中纤维素含量最高的天然产物。此外，木材、

2、作物秸秆等也富含纤维素。2.纤维素酶(1)组成：纤维素酶是一种复介酶,至少包括三种组分，即G酶、C,酶和制萄糖井酶。(2)作用：纤维素G鯉9酶纤维二糖葡輕f酶葡萄糖(3)实验验证:试管滤纸条缓冲液pH=4.8纤维素酶(70〜80U/mL)条件结果11cmX6cm10mL1mL将两支试管固定在50mL的锥形瓶中，在摇床上以140r/min的转速振荡反应1h完全分解21cmX6cm11mL基本无变化3.纤维索分解菌的筛选⑴方法：刚果红染色法,常用的有两种。-种是先』咅养微牛［物,再加入刚果红进行颜色反应；另一种是在倒平板时就加入刚果红

3、。(2)原理:培养基中会出现刚果红红色纤维素酶；以纤维素分解菌纤维素复合物I为中心的透明•圈，据此筛选［跟随名师•解疑难］纤维素分解菌的筛选(1)筛选原理：刚果红能与培养棊中的纤维索形成红色复介物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖反应。当纤维素被纤维索酶分解后，该复合物无法形成，培养基中会出现以纤维索分解菌为中心的透明圈。(2)筛选方法:方法一方法二操作先培养微生物，再加入刚果红倒平板吋加入刚果红优点显示出的颜色反应基本1•.是纤维素分解菌的作用操作简便，不存在菌落混杂的问题缺点操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落Z间发生混杂①由于在

4、纤维素粉、琼脂和土豆汁屮都含有淀粉类物质，可以使能够产牛淀粉酶的微工物出现透明圈较为模糊的假阳性反应②有些微牛物具有降解色素的能力，长时间培养会降解刚果红而形成明显的透明圈知识点:f实验设计和课题延伸［白读教材・夯基础］1.实验设计流程(1)土壤取样:选择富含红继索的环境［①目的：增加纤维素分解菌的浓厦,确保能够从样品中分离到所需要的微生物⑵选择培养②操作方法:将土样加入装有m「选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下振荡培养1〜2d,直至培养液变鯉，也可重复选择培养G)梯度稀释(1)涂布培养：将样品涂布到鉴别纤维

5、素分解菌

6、的培养基上(2)筛选菌株:刚果红染色法，挑选产生透明圈的菌落2.课题延伸——纤维素分解菌的鉴定(1)为确定得到的透明圈中的菌落是纤维素分解菌，蛊耍进行发酵产纤维素酶的实验。纤维素酶的发酵力法有液体发酵和固体发酵两种。(1)纤维素酶的测定方法，一般是采川对纤维素酮分解滤纸等纤维素后所产生的衙萄糖进行定最测定。話思垮捉究1.阅读教材P29旁栏中的纤维素分解菌选择培养基的成分回答下列问题。(1)旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？提示：是液体培养基，因为配方屮无凝固剂。(2)这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果

7、有，是如何进行选择的？提示：有选择作用。本配方中的唯--碳源是纤维索粉，所以能分解纤维索的微牛物可以大虽繁殖，而不能分解纤维索的微生物被抑制。(3)你能否设计一个对照实验，说明选择培养的作用？提示：用接种了的牛肉膏蛋片腺培养基进行对照，若牛肉膏蛋白腺培养基上的菌落数大于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基具有筛选作用。2.在实验过程中，为什么要进行梯度稀释？提示：通过梯度稀释使聚集在一起的微生物分散成单个细菌，在培养基表面形成单个的菌落。3.分离分解纤维素的微生物实验，只是分离纯化的第一步，为确保得到的是纤维素分解菌，还需要做什么

8、工作？提示：还需要进行发酵产纤维索酶的实验。［跟随名师・解疑难］1.纤维素分解菌的筛选过程小所用两种培养基的成分和作用(1)纤维索分解菌的选择培养基：组分含量提供的主要营养物质纤维素粉5g碳源、能源NaNO31g无机盐Na2HPO4•7H201.2gKH.PO-!0.9gMgSO-t・7氏00.5gKC10.5g酵母膏0.5g特殊营养成分、碳源、氮源水解酪索0.5g氮源、特殊营养成分上述物质溶解示，用蒸镉水定容至1000II1L(2)鉴别纤维素分解菌的培养基:组分含量提供的主要营养物质CMC-Na5〜10g碳源酵母膏1g碳源、氮源

9、、特殊营养成分KHvPOi0.25g无机盐琼脂15g凝固剂土豆汁100mL碳源上述物质溶解后，用蒸镭水定容至1000mL2.纤维索分解菌的筛选过程屮所川两种培养基的比较(1)纤维素分解菌的选择培养基为液体培养基，利用液体培养基能使营养成分充分消耗，