微生物菌体大小及菌群数量的测定

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1、实验九微生物菌体大小及菌群数量的测定姓名：宿智新班级：2011级生科2班组别:六组学号:201100140155一、实验目的1.学习掌握显微测微尺、血球计数板的使用方法；2.掌握微生物细胞大小的测定方法，增强对微生物细胞大小的感性认识;3.掌握微生物数量的测定方法。—x实验原理1.微生物大小的测定微生物大小的测定，需借助于特殊的测量工具一显微测微尺，它包括H镜测微尺和镜台测微尺两个互相配合使用的部件。镜台测微尺（图一）是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为lmm,精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100个小格，每一小格长度为0.01mm

2、,即10umo刻线外有一直径为线粗为0.1mm的圆,以便调焦时寻找线条。刻线上还覆盖有厚度为0.17mm的盖玻片，可保护刻线久用而不损伤。镜台测微尺并不直接用来测量细胞大小，而是用于校正FI镜测微尺每格的相对长度。目镜测微尺（图二）是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般有等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物像。由于不同显微镜或不同的H镜和冃镜组合放大倍数不同，H镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。因此，用口镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以

3、求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对氏度。然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。图一镜台测微尺及屮央部分放人图二LI镜测微尺及安装111山liiliiiihiiihiihHiliiidiiiihii

4、附0510152025«JJ40图三2.微生物数量的测定一显微镜计数显微计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特定的具有确定容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接观察、计数的方法。忖前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板，Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们可用于各

5、种微生物单细胞（他子）悬液的计数，基本原理相同。其屮血细胞计数板较厚，不能使用油镜，常用于个体相对较大的酵母细胞、霉菌砲子等的计数,而后两种计菌器较薄，可用油镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。除了用上述这些计菌器外，还有用已知颗粒浓度的微生物细胞（泡子）样品混合后根据比例推算后者浓度的比例计数法。显微计数法的优点是直观、快速、操作简单，缺点则是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和，但难以对运动性强的活菌进行计数。冃前已有一些方法可以克服这些缺点，如结合活菌染色、微室培养（短时间)以及加细胞分裂抑制剂等方法來达到只计数活菌体的口的，或用染色处理等杀死细胞以计数

6、运动性细菌等。本实验以最常用的血细胞计数板为例对显微计数法的具体操作方法进行介绍。血细胞计数板是一块特制的载玻片，其上由4条槽构成3个平台。屮间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上齐刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如图所示。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格乂分成25个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个。每一个大方格边长为1mm,则每-一个大方格的面积为lmm

7、S盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm,所以计数室的容积为0.1mm3(10'4mL)o计数空放大田图2血球计数板的结构图A.正血图B.侧面图计数时，通常数5个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，，再乘上25或16,就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成ImL菌液的总菌数。以25个中方格的计数板为例，设5个中方格中的总菌数为A,菌液稀释倍数为B,则:ImL菌液中的总菌数二A/5X25X104XB三、实验器材1•菌种酿酒酵母2d合成培养基培养物。1.溶液和试剂香柏油，二甲苯，蒸憾水，吕氏碱性美蓝染液，95%乙醇。1.仪器和其他用品冃镜测微尺

8、，镜台测微尺，血细胞计数板，载玻片，盖玻片，接种环，酒精灯，毛细滴管，试管，吸管，普通光学显微镜，擦镜纸和软布等。四、实验步骤1.测定酿酒酵母细胞的大小（1）fl镜测微尺的安装取出接目镜，把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝下放在目镜镜筒内的隔板上，然后旋上口镜透镜，再将日镜插回镜筒内。（双□显微镜通常配有屈光度调节环，不能被取下，因此使用双忖镜显微镜时H镜测微尺一般都安装在右目镜中。）（2）校正冃镜测微尺将镜台测微尺刻度刻度面朝上放在显微镜载物台上。先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野屮央，调节焦距，当清晰地看到镜台测微尺的刻度后，转动忖镜使忖镜

9、测微尺的刻度与镜台测微尺