备课笔记-色谱分析导论

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1、教师备课笔记授课对象2016级检验、输血专业本科授课时间2017年3月29口教学内容备注第六章色谱分析导论基本要求：1.理解混合物中各组分在色谱柱内得到分离的原因2.理解柱效率的物理意义及其计算方法3.理解速率理论方程对实际分离的指导意义4.掌握分离度的计算及影响分离度的重要色谱参数6.1色谱法及其分类6.1.1色谱法色谱法（Chromatography）是一种分离分析方法。它是利用各物质在两相中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质在两相中进行多次反复的分配來达到分离的目的。俄国植物学家M.Tswett于1906年首先提出色谱法。Tswett把植物绿叶的色素混合液加

2、在一根装有干燥固体碳酸钙颗粒（称固定相）的玻璃长管（称为填充色谱柱）上端，然后让洗脱剂（亦称流动相）石油瞇自上而下流过。在石油瞇不断冲洗下，原來在柱子上端的色素混合液向下移动。由于色素中各组分的性质的差异，与碳酸钙的作用力大小不同，作用力小的先流出，作用力大的后流出，最后分离成不同颜色的清晰色带。因此称这种方法为色谱法。然后将潮湿的碳酸钙挤出玻璃管，用刀将各色带切下，对其中的组分用合适的分析方法分别进行测定。这是经典色谱法，各色素的分离过程与其含量测定过程是离线的，即不能连续进行。现代色谱法的分离过程与其含量测定过程是在线的，即连续进行。当一个二组分（A和B）的混合样品在“时间

3、从柱头加入，随着流动相不断加入，洗脱作用连续进行，直至A和B组分先后流出柱子而进入检测器，从而使各组分浓度转变成电信号后记录在记录纸上，或显示在荧光屏上，或由电脑贮存后打印出来。6.1.2分类表6-1色谱法分类以图示方法描述色谱法流劫相幺秋网京相幺称气体气相色谱固体气固色谱(gassolidchromatography,GSC)(gaschromatography,GC)液体气液色谱(gasliquidchromatography,GLC)液体液相色谱*固体吸附剂液固色^(liquidsolidchromatography,LSC)(liquidchromatography,L

4、C)液体液液色谱(liquidliquidchromatography,LLC)键合固定柑键合相色谱(bondedphasechromatography,BPC)多孔固体尺寸排阻色谱(sizedexclusionchromatography,SEC)离子交换剂离子交换色谱(ionexchangechromatography,IEC)纸纤维中的水纸色谱**(paperchromatography,PC)固体吸附剂薄层色谱**(thinlayerchromatography,TLC)超临界超临界流体色谱类似LC超临界流体色谱流体(supercrilicalfluidchromato

5、graphy,SFC)*为泛指幺称，冃前一般指高效液相色谱，(highperformanceliquidchromatography,HPLC)Wh=4o6.2色谱流出曲线和采请6.2.1色谱流岀曲线在色谱法中，当样品加入后,样品中各组分随着流动相的不断向前移动而在两相间反复进行溶解、挥发，或吸附、解吸的过程。如果各组分在固定相屮的分配系数(表示溶解或吸附的能力)不同，它们就有可能达到分离。分配系数大的组分，滞留在固定相屮的时间长，在柱内移动的速度慢，后流出柱子，分配系数小的组分则相反。分离后的各组分的浓度经检测器转换成电信号而记录下来，得到一条信号随时间变化的曲线，称为色谱流

6、岀曲线，也称为色谱峰，(1)基线操作条件稳定后,无样品通过时检测器所反映的信号一一时间曲线。稳定的基线是一条水平直线，(2)死时间to不被固定相吸附或溶解的组分，即非滞留组分(如空气，适用于热导检测器或甲烷，适用于火焰离子化检测器)从进样开始到色谱峰顶(即浓度极大)所对应的时间。死时间主要与柱前后的连接管道和柱内固定相Z间的空隙体积的大小有关。(3)保留时间tR组分从进样开始到色谱峰顶所对应的时间。(4)调整保留时间rR扣除死时间后的组分的保留时间。它表示该组分因吸附或溶解于固定相后，比非滞留组分在柱内多滞留的时间(gPR・S)。(5)峰高h色谱峰顶到基线的垂直距离。(6)半峰

7、宽色谱峰高一半处的宽度，又称半宽度。(7)峰底宽从色谱流出曲线两侧拐点所作的切线与基线交点之间的距离，也称基线宽度。(8)标准偏差o正态分布曲线两侧拐点之间距离的一半，即0.607倍峰高处的色谱峰宽度的一半。。与半峰宽的关系为：VV,=2o^2In2与峰底宽的关系为：W=0(6.2)组分在柱内理想的浓度分布构型可用正态分布曲线方程来表示：mr]八_5宀c=F«VIFexp[-2(0)_J(6.3)式中,c为时间t时的浓度；F为流动相的体积速度；m为组分的质量；g为组分保留时间，其对应浓度为％