大蒜根尖多倍体诱发及细胞学鉴定(付强)

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1、柠檬黄诱导大蒜根尖细胞微核实验付强200900232023山东大学09级临床医学八年制同组者：张宇鹏摘要：柠檬黄是常用的食品添加剂Z-o本次实验通过利用柠檬黄对大蒜根尖进行诱导，并测定微核产生率来了解柠檬黄对人体的影响，同时了解微核检测的方法和意义。关键词:大蒜根尖柠檬黄诱导微核EXPERIMENTONINDUCINGMICROKERNELOFGARLICROOTTIPS，CELLSBYLEMONYELLOWFuKiang(Clinicalmedicineclassofeightyears,Shando

2、ngUniversity)Groupmember:ZhangYupengAbstract:Lemonyellowisaoftenusedkindoffoodadditive.Inthisexperiment,weinducegarlictips'cellsusinglemonyellow,andmensuratetherateofmicrokernelsinordertoknowtheinfluenceoflemonyellowtohumanbody・Meanwhile,wecanrealizethem

3、ethodsandimportanceofmicrokernelmensurating・Keywords:garlicroottips;lemonyellow;inducement;microkernel柠檬黄（分子式见下图）是广泛应用于工业和食品产业的着色剂。因其毒性较低，世界卫生组织给予了它一个较为宽容的每日最大摄入量。在本次实验屮，我们利用柠檬黄对大蒜根尖进行处理，并统计根尖细胞微核产生率，来估计其对人体可能产牛的影响。SO3Na1.实验材料与方法1.1实验材料与用品大蒜;柠檬黄（固体）；卡诺固定

4、液；lmol/lHCl；70%乙醇；蒸馆水；显微镜一台；改良苯酚品红；双面刀片；盖玻片；载玻片；解剖针；吸水纸。1.2实验步骤1.2.1确定柠檬黄溶解度取10g清水，不断向其中加入柠檬黄至饱和，通过分析天平称量出加入的柠檬黄的质量。最终测定加入0.1600g时开始出现少许不溶物。确定该品种柠檬黄溶解度为1.6go1.2.2取材及处理将饱满大蒜蒜瓣去皮，插在清水中25°C恒温培养箱中培养。待根尖长至0.5・lcm左右时将蒜瓣取出。配置浓度为1.6g/Lo将根部切下放入卡诺固定液中固定24小时，之后转入70

5、%乙醇中备用。1.2.3解离采用酸解法对根尖进行解离。将I占I定好的根部取出，清水洗涤后放入预热好的，盛有lmol/LHC1的小管中，再将管放入60°C水浴锅中恒温处理5-10mino恒温处理结束后水洗3次。1.2.4染色将根部在解剖镜下观察，切取根尖细胞形态较为方正，两个明亮区域中间较暗的分生组织区，用改良苯酚品红染色15mino1.2.5压片染色完成后盖上盖玻片，用滤纸吸净多余的染液。将片子平放在实验台上，用一个双面刀片插到盖玻片和载玻片之间的一角，左手紧压盖玻片防止滑动，右手持解剖针柄轻轻敲打盖玻

6、片使其分散完全。将刀片轻轻撤出，再用针柄轻敲,最后用拇指用力垂直按一下盖玻片使细胞分散压平。1.2.6镜检需要找到清晰、染色和分散较好的屮期分裂相进行观察。正常大蒜2n=16,需分别找到二倍体和多倍体进行计数。先用低倍镜观察，找到分散较好的染色体后转用高倍镜观察。2.实验结果及分析显微镜下观察至I」的结果如下图二倍体大蒜根尖（2n=16）（因分散效果稍差标号可能错误）四倍体大蒜根尖（2n=32）（未能数出32条，可能在分散过程中遗失，或因分散效果不好存在重叠难以看清）3•讨论及注意事项3・1解离时间和温

7、度应严格控制。解离时间过短则解离不够，压片不易分散；解离吋间过长，解离过度容易导致材料过软而使后面操作难以进行。3・2解离也可采用酶解法。用10-20g/L的果胶酶，或与10-50g/L的纤维素酶混合使用。3.3切取分生区时应注意，根冠可能在前而步骤中已丢失，故前而不必切取过多。细胞开始拉长的区域即为伸长区，可略保留一些。注意保留的细胞不可过多，否则导致细胞过密难易观察。3.4除显微镜下直接鉴定多倍体外，还可通过观察气孔的大小和花粉粒的体积进行间接鉴定。3.5秋水仙素诱导植物多倍体的方法还有种子浸渍、点

8、滴法、毛细管法、羊毛脂法、复合处理、离体组织水平上诱导单个细胞等方法。参考文献：[1]张素之，李纪荣.秋水仙素诱导大蒜四倍体的研究[J].核农学报，2010,20(4)：303—308.[2]谢晓玲，邓自发.秋水仙素对大蒜生长的影响及多倍体诱导效应分析[J]•安徽农业科学，2009,37(9)：4191-4194