微生物反面教材

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1、姓名；**班级；12生物工程学号；201242010**多功能菌种的提纯与制备摘要对于多功能菌种，可自制高效多功能微牛态发酵饲料，为绿色生态化养殖提供基础保障，正常养殖使用，改善养殖环境，保障动物健康，增进动物的生命活力，替代抗生素，降解动物体内毒素，保护地球环境和人类安全。同时结果证明不断对菌种进行提纯复壮，使菌种保持原有品种的遗传物质，恢复原来的生活力和优良种性，对防止菌种过早退化、保障子实体优质高产有一定的作用。关键词；人工栽培制备；提纯复壮2003年开始，梅州农业学校进行“多功能菌种人工栽培技术研究”课题研究并获得成功，2004年通过梅州市科技局组织的成果鉴定，并获2005年度梅

2、州市科技进步三等奖。现在校内建立了规模化生产基地，取得了较好的经济效益和社会效益，但在生产过程中，遇到了一个普遍性的难题，就是容易出现菌种老化或衰退，造成产量和质量不稳定[1-4]o为了降低这种因菌种退化而带来的风险，笔者在菌种提纯复壮技术上进行了研究，现将结果总结如下。1材料与方法1.1试验材料1.1.1菌种。经栽培试验不断去劣择优以获得优良菌株。优良菌株的形态特征：菌丝生长快、洁白致密，后期转浅黄色，见光后易转桔黄色；在栽培屮，选择原基分化早口整齐，子实体生氏快、粗壮、抗杂菌能力强、耐高温、砲子多且呈桔黄色的作为优良菌株，同时作为待复壮的菌株。1.1.2培养基配制。培养基中土豆200

3、g(煮汁)、蔗糖20g、磷酸二氢钾1,硫酸镁1g＞蛋白E东1g＞琼脂20引加水定溶至1000mL,经高压灭菌30min。在24〜25°C环境下制成斜面培养基。1.2试验设计试验设4个处理，分别为：抱子分离培养(A)；虫体回接法分离培养(B)；组织分离法培养(C)；未经复壮作为对照(CK)O1・3试验实施1.3.1无菌处理。所选待复壮优良菌株了实体，在无菌条件下经75%酒精和0.1%升汞溶液进行分离处理；分离所使用的工具要经过湿热灭菌、酒精擦抹、火焰灼烧等多种表面杀菌处理后，才可直接接触培养基、组织块。在21〜25°C环境下静态培养，待菌丝布满斜面，再经考种，反复筛选，得到提纯复壮后的优良

4、菌株。1.3.2菌种分离培养。按试验设计采用以下2种分离方法：①抱子分离法。选取待复壮菌株的子实体，用0.1%升汞溶液，或75%酒精进行表面消毒后，用无菌水清洗表面药液，置于盛有综合培养基容器上方悬空，在21〜23°C下静置培养,待培养基表而出现星芒状虫草菌落时[5-6],在接种箱内挑取单个或多个菌落置试管斜面培养基上培养。待菌丝布满斜面可得到菌种A。②组织分离法。在优良菌株中选取无杂菌的长度2〜4cm状态好的的子实体，用无菌水冲洗，刮掉表层,取肉质大小为1mm于斜面培养基上，培养基斜面上应无游离冷凝水，以防细菌感染扩散，致使分离失败。在24〜25°C培养15d,菌丝布满斜面，得到菌种C

5、。1.3.3菌种的去污捉纯。无论采用上述哪种菌种分离法，培养初期必须判断菌丝是否已受朵菌污染。分离培养后，若发现被有色的霉菌小斑点污染，最好放弃。如曲同一材料分离得来的，每支试管都是如此，那就要重新分离。若污染点远离接种点，多是无菌操作屮感染杂菌所致，可用前端菌丝切割法或基内菌丝挑取法转管提纯。严格地说，在斜面培养基上的非接种部位若见口色菌丝，则应认为是杂菌菌落，就应立即捉纯，采用切割法或基内菌丝挑取法捉纯后，一般都能获得较好的纯菌丝。1.3.4考种。将经过不断提纯复壮后的3种菌种（处理A、处理B、处理C）,分别置米饭培养基上，于18〜23°C下培养20〜30d,观察生长情况。若见有细菌

6、或霉菌污染，应进一步纯化；若无杂菌污染，子实休主长正常，说明菌种可靠,可继续扩大培养。2结果与分析曲表1可知，经提纯复壮后的菌种处理A、处理B、处理C菌丝口平均生长量分别为5.75、6.12、5.15mm,与未经复壮处理CK的菌种菌丝日平均生长量4・12mm相比都有所提高，且子实体长势比较均匀、个数多；子实体栽培试验中复壮的菌种与未复壮处理的菌种子实体转色情况观察比较：处理B转色最快，处理C、处理A次Z,未经复壮处理的CK转色最慢；从出丝所需天数来看经复壮的菌种处理A、处理B、处理C出丝天数分别为14、10、12d,而未经复壮处理的CK出丝天数为18d,所需出丝天数也缩短了；从产量上看，

7、所采子实体重量也明显提高,从14.8g/瓶分别提升到21.3、23.5、20.2g/瓶中3结论与讨论试验结果表明，提纯复壮的技术方法可以获得比较纯的优质菌种。但是菌种要求的外界条件相当严格，受外界因素影响明显，如生产屮菌种的移接代数、有效的菌种保藏方法、菌种生氏营养条件和外界环境等，仅以常规提纯复壮的方法,述不能真正解决菌种衰退的问题。目前，冇研究发现组织细胞产后的脱氢酶与细胞活力成止比，因此也可以通过脱氢酶的测定来提早淘汰退化菌株