生物化学—蛋白质

《生物化学—蛋白质》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、氨基酸性质与密码子的关系:9种氨基酸有2个密码子5种氨基酸有4个密码子3种氨基酸有6个密码子1种氨基酸有3个密码子2种氨基酸有1个密码子第二个字母为U的密码子对应的是疏水性氨基酸第二个字母为C的密码子对应的是小或较小氨基酸第二个字母为A或G的密码子对应的是极性氨基酸1•氨基酸个性研究的重要性解释蛋白质结构与功能的关系从一级结构预测高级结构氨基酸个性了解得越深刻，在根据一级结构预测蛋白质的立体结构时，考虑问题也就越金而，预测的正确性也就越高。维持空间构象的因素静电作用、氢键、范德华力、疏水作用、配位键、二硫键及其他因素蛋白质

2、的时空特性（1）蛋口质的空间性信号肽对蛋白质或肽链的定向传送己成为蛋白质研究的一个很重要的方而。特征结构：溶酶体酶分子屮的廿露糖-6-磷酸，酶原及酶原激活，同形异位突变（2）蛋白质的时间性肿瘤发生时岀现胚胎分化早期所岀现的Pr,如肝癌岀现的甲胎蛋白。细胞周期不同吋期蛋白质表达的调控是又一个重耍研究领域。2•分离纯化依据的性质（1）大小（2）性状（3）电荷（4）等电点（5）电荷分布（6）疏水性（7）溶解度（8）密度（9）配体结合能力（10）金属结合能力（11）可逆性缔合（12）特界性序列或结构。（13）非寻常性质（14）基因

3、工程构建的纯化标记3•分离纯化的一般步骤（一）前处理：动物材料应先剔除结缔组织和脂肪组织；种了材料应先去壳甚至去种皮以免受单宁等物质的污染，油料种了最好先用低沸点的冇机溶剂如乙瞇等脱脂。然后根据不同的情况，选择适当的方法，将组织和细胞破碎。动物组织和细胞可用电动捣碎机或匀浆器破碎或用超声波处理破碎。⑴选材（2）破碎（3）混合物的分离（-）粗分级分离（1）盐析。（2）等电点沉淀。（3）有机溶剂分级分离。（4）超滤。（5）凝胶过滤。（6）冷冻干燥（三）细分级分离-般使用层析法包括凝胶过滤，离了交换层析，吸附层析以及亲和层析等。

4、必耍时还可选择电泳法，包括区带屯泳、等电聚焦等作为最后的纯化步骤。用于细分级分离的方法一般规模较小，但分辨率很高。结品是蛋白质分离纯化的最后步骤。尽管结品并不能保证蛋白质一定是均一的，但只有某种蛋白质在溶液中数量上占优势时才能形成结品。结品过程本身也伴随着一定程度的纯化，而重结晶乂可除去少量夹杂的蛋白质。由于结晶中从未发现过变性蛋口质，因此蛋£1质的结晶不仅是纯度的一个标志，也是断定制品处于天然状态的冇力指标。1•依据分子大小、电荷不同的纯化方法一、根据分子大小不同的纯化方法(1)透析和超滤透析一一只用于除盐类和小分子杂质

5、透析是利用蛋白质等大分子不能通过半透膜的性质，使蛋白质和其它小分子物质如无机盐单糖等分开。超滤一一除小分子杂质，分离、浓缩蛋门质(2)密度梯度离心法生物大分子及颗粒的沉降不仅决定于它的大小，而且也取决于它的密度。颗粒在具有密度梯度的介质中离心时，质量和密度大的颗粒沉降的快，并且每种蛋a质颗粒沉降到与自身密度相等的介质密度梯度时，即停止不前，最后各自在离心管屮被分离成独立的区带。分成区带的样品可以在管底刺一个小孔逐滴放岀，分步收集。(3)凝胶层析是分了大小分离pr混合物的有效方法二、根据电荷不同的纯化方法⑴电泳：不同的pr分

6、子由丁淇净电荷量和分子大小的不同，在相同条件下电泳,泳动速度不同，彼此得到分离。由于"具有两性电离性质，当“、溶液pH值大于等电点时，该pr带负电荷，在电场中向止极移动，反Z则带止电荷，在电场中向负极移动，只冇pr溶液的pH值在"等电点时静电荷为零，在电场屮才不向任何一极移动。(2)聚丙烯酰胺凝胶电泳(3)毛细管电泳(4)等电聚焦：在一定抗对流介质(如凝胶)中加入两性电解质载体(Ampholyte,是一种多氨基多竣基的混合物，由异构物和同系物组成，其pK和pl值各口相异却又相近)，当直流电通过时,便形成一个曲阳极到阴极pH

7、值逐步上升的梯度。两性化合物在此电泳过程中，就被浓集在与其pl相等的pH区域，从而使不同化合物能按其各自等电点得到分离。(5)聚焦层析：该法是在等电点聚焦方法基础上发展起來的，其分离纯化蛋白质的依据是等电点的井界和离了交换行为。蛋白质按其等电点在pH梯度环境中进行排列的过程叫做聚焦效应。pH梯度的形成(由多缓冲剂和多缓冲交换剂形成)是聚焦效应的先决条件，如果一种蛋白质加到已形成pH梯度的层析柱上时，由于洗脱液的连续流动，蛋白质将迅速地迁移到与它等电点相同的pH处。从此位置开始，该蛋白质将以缓慢的速度进行吸附、解吸附，直到在

8、等电点pH时被洗出。在聚焦层析过程中，一种样品分次加入时，只要先加入者尚未洗出，并且有一定的吋间进行聚焦，剩余样品还可以加到柱上，其聚焦过程都能顺利完成。（6）离子交换层析：离子交换柱层析是一种利用离子交换树脂作为介质，即离子交换剂的层析法。离子交换树脂是人工合成的，具冇酸性基团或碱性基团，并具冇网状结