Biacore检测抗原Fc

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1、Biacore检测Fcɣn效应分子和IgG相互作用的操作方法1目录一、实验目的：...........................................................................................................................................3二、实验试剂和耗材.........................................................................

2、..........................................................3三、实验步骤..............................................................................................................................................4（一）、仪器准备..............................................

3、.....................................................................................4（二）、样品稀释...................................................................................................................................8（三）、样品检测过程..........................

4、.................................................................................................8（四）、实验结果分析.........................................................................................................................222BiacoreT200检测Fcɣn效应分子与IgG结合操作指

5、南一、实验目的：利用Biacore检测Fcɣn效应分子与IgG结合的动力学数据Ka、Kd及亲和力数据KD。抗原Fcɣn分子量为43.5KD，商业化蛋白带有His标签；IgG分子量为150KD。本实验利用NTA芯片捕获Fcɣn，IgG分子作为分析物检测Fcɣn与IgG结合的动力学数据和亲和力数据。二、实验使用机型、试剂和耗材1、本实验所用的机型为：BiacoreT200。2、S系列NTA芯片及试剂盒（试剂盒内含有0.5mMNicl2溶液和350mMEDTA）。S系列NTA芯片货号：BR-1004-07（一片装），BR-1

6、000-34（三片装）；NTA试剂盒货号：28-9950-43。购买地均为GEHealthcare。3、缓冲液：10×pBS-P+pH7.4（货号：28-9950-84）；购买地为GEHealthcare。4、去离子水（用0.22uM膜过滤过）。5、配体Fcɣn：如果为商业化蛋白粉末，用水稀释到100ug/ml或200ug/ml，分装在-20℃保存。推荐使用：Sinobio，无论使用哪家的Fcɣn，客户需要确定Fcɣn的活性，在进行溶解时，确保溶解液中不含Tris。6、IgG：母液IgG浓度至少在1.5mg/ml，样品

7、体积在200ul以上纯度>90%以上（即跑SDS-PAGE胶有两条带）。如果IgG中的盐离子浓度或多糖浓度过高可进行脱盐，如果体积小于500ul选择GEHealthcare的PDMiniTrapTMG-25，货号为28918007；如果体积小于1ml选择货号为28918008的GEHealthcare的PDMiniTrapTMG-25；如果体积在1.75-2.5mL选择GEHealthcare的PD-10Deasalting，货号为17085101。36、其他耗材：无盖1.5mlEP管（货号：BR-1002-87）、9

8、6孔板（货号：BR-1005-03）、2型橡胶盖（货号：BR-1004-11）、96孔板封口膜（货号：28-9758-16），购买地均为GEHealthcare。三、实验步骤（一）、仪器准备1、开机操作1)打开BiacoreT200系统和电脑的电源开关。BiacoreT200的电源开关位于系统背面的左下角。开机后，需等待检测单元的