CTC循环肿瘤细胞

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1、肿瘤循环细胞（CTC）检测行业背景中国肿瘤发病率285.91/10万，每年新发病例321万，6人/分钟确诊恶性肿瘤。肿瘤13标:中晚期蛋白标记物，PSA,CA125,CA199等。影像学检测：CT，MRI,PET，仅检出5mm以上肿瘤。病理诊断：穿刺样本检测，创伤性。技术瓶颈：仅能检测中晚期肿瘤、难以早期诊断！液体活检：通过检测血液及其他体液中更加特异的肿瘤指纹来实现肿瘤早期诊断。循环肿瘤细胞（CTC）：肿瘤上脱落的活细胞，可能代表了转移的种子；循环肿瘤DNA（ctDNA）则是来自死细胞的遗传物质，通常以DNA短片段的形式存在。循环肿瘤细胞，circulating

2、tumorcell，CTC1896年在患者外周血中发现与原发肿瘤细胞体积和形态相似的细胞目前CTCs定义为自发或因诊疗操作脱离实体瘤原发灶或转移灶进入外周血循环的肿瘤细胞在肿瘤转移灶形成前即可在外周血中检测到循环肿瘤细胞肿瘤循环细胞的特性稀有性：每ml血液约107个白细胞中仅有1个CTC非典型形态：比血液细胞、正常组织细胞的体积大、细胞核大，不规则，核质比高、不容易发生形变异质性：细胞表面抗原标志物表达差异、携带不同的分子信息、转移潜力差异易聚集成团CTM：成瘤迁移能力是CTC的23-50倍外周血细胞的遮蔽阻碍了它们的分离与分子鉴定，因此ＣＴＣ的检测是制约其临床应

3、用的关键循环肿瘤细胞的概念与特性循环肿瘤细胞的特性CTCs可以是间质型、上皮型、上皮间质混合型、成团的CTCs(CTM)CTCs检测的临床可行性实时方便及时准确微创健康状态癌前病变恶性肿瘤肿瘤转移CTC检测临床意义CTC监测分析耐药性检测动态跟踪CTC数目，判断是否产生耐药性肿瘤复发检测CTC数目增多是肿瘤复发的前兆肿瘤新药物的开发配合研制新的抗肿瘤药物体外早期诊断肿瘤在1mm时，血液中可检测出CTC预后判断根据治疗前后CTC个数判断预后及存活时间化疗药物的疗效评判根据化疗前后CTC数目变化，确定药物是否有效如何检测CTCs？由于外周血中CTC非常稀少，通常CTC

4、检测会首先利用细胞的物理性质或生物特性等对CTC加以分离富集。CTCs的富集：如何获取CTCs？※从红细胞和白细胞中富集恶性肿瘤细胞CTCs的鉴定：如何鉴定所获细胞为CTCs？※将恶性肿瘤细胞与红细胞、白细胞、正常上皮细胞、造血干细胞等区分开来循环肿瘤细胞的检测对于分离富集的CTC可以进行基因型或者表型分析等以计数CTC或者鉴定其分子特性免疫表型分析：靶细胞丢失PCR分析：高效率，高灵敏度，特异性，操作简单。假阳性率较高、细胞形态学被破坏、需要更严格的标本保存条件和实验条件单个CTC分子信息监测（克服白细胞污染）循环肿瘤细胞的分析鉴定循环肿瘤细胞的分离富集CTCs

5、分离、分型、分析原理技术产品免疫捕获法(根据细胞表面标志物)阳性富集法：CellsearchTM系统CTC芯片（CTC-chip）MACS®CellSeparation阴性筛选法：EasySepCyttel过滤法(根据细胞大小)ISET膜过滤密度梯度离心（根据细胞密度）OncoQuick分离体系CTCs的检测方法及代表技术产品免疫捕获法——磁珠分选原理：将特异性抗原包被在已有同源二抗的磁珠上制成免疫磁珠再与靶细胞上抗抗原结合成“靶细胞—抗原抗体—磁珠”复合物，在磁场作用下向一定方向移动，从而富集靶细胞.分选策略阳性富集：使用表面耦联抗目的细胞抗体的磁珠，细胞与磁珠

6、结合后直接在磁场中被分离出来。负性筛选：通过去除无关细胞使目的细胞得以纯化阳性富集CellsearchTM系统CTC芯片（CTC-chip）MACS®CellSeparation磁性细胞分选系统原理：采用抗EpCAM（CD326）结合免疫磁珠捕获EpCAM阳性CTCs特点：捕获的CTCs纯度较高能够捕获到血液中上皮型、上皮间质混合型的CTCs无法捕获到间质型CTCs（EpCAM阴性）magnetAnti-EpCAMCoatedferrofluids7.5mlAnti-CK(epithelialcells)Anti-CD45(WBCs)DAPI(viablecell

7、s)Automatedfluorescencedetectionsystemmagnet使用抗EpCAM抗体抗体包被磁微粒，使其与肿瘤细胞结合，在特定磁场作用下达到分离CTC的目的。阳性富集-CellsearchTMCTCWBCCellsearchTMCTCs鉴定上皮来源的CTCs的判定：DAPI（细胞核）阳性、角蛋白CKs阳性、CD45阴性芯片的表层排布了78000个包被抗EpCAM抗体的微位点血液样本流经芯片时，抗体与肿瘤细胞结合粘附在芯片上制造相对困难，成本昂贵，显微位点周围的血流通畅性限制了与抗体覆盖位点接触的CTC数量阳性富集-CTCs-Chip原理：联

8、合上皮细胞