HBSAg测定和ABO血型鉴定

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1、ABO血型鉴定及HBSAg测定廖振林食品学院2006年秋凝集反应【实验目的】1．了解凝集反应的原理、基本类型及其临床意义。2．掌握玻片凝集实验、间接凝集实验的实验方法和结果分析。【概述】在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。凝集反应是一种定性的检测方法，也可以进行半定量检测。凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝集反应。由于凝集反应方法简便，目前在临床检验中仍被广泛应用。一、直接凝集反应细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集

2、反应。常用的凝集试验有玻片法和试管法两种。玻片凝集试验——ABO血型鉴定玻片凝集试验为定性试验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗原各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便，快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。【实验原理】人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引

3、起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。ABO血型的划分红细胞表面Ag血清中AbA型A抗BB型B抗AAB型A、B—、—O型—、—抗A、抗B【实验材料】1．ABO血型鉴定试剂盒　内含抗A分型试剂和抗B分型试剂各1支。2．一次性采血针1枚、洁净玻片2块、75％酒精、灭菌棉签。3．84消毒液二、间接凝集反应将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。根据载体的不同可将间接凝集反应分为：间接血细胞凝集

4、试验、间接乳胶凝集试验（及间接乳胶凝集抑制试验）和金黄色葡萄球菌协同凝集试验等。间接凝集抑制试验——妊娠试验【实验原理】可溶性抗原致敏的乳胶颗粒与相应抗体作用可使乳胶颗粒凝集，此为间接乳胶凝集试验。若使抗体先与可溶性抗原作用，再加入该抗原致敏的乳胶颗粒，则乳胶凝集被抑制，此为间接乳胶凝集抑制试验。孕妇尿中绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增高。HCG与抗HCG抗体先作用后，再加入HCG致敏的乳胶颗粒，不出现凝集反应，此为妊娠试验阳性；非孕妇尿中HCG含量不足以消耗掉抗HCG抗体，抗体与后加入的HCG致敏乳胶结合呈现凝

5、集现象，则妊娠试验阴性。【实验材料】1．妊娠诊断试剂盒：内含抗血清（抗HCG）、乳胶抗原（HCG致敏）各一支2．待检尿、孕妇尿、正常尿。3．有格玻片和毛细吸管等。【实验方法】1．在玻片的第1、第2和第3格内分别加1滴正常尿、待检尿及孕妇尿。2．每格内加入妊娠诊断试剂抗血清1滴。轻轻摇动1~2min使其充分混匀。3．每格加入乳胶抗原1滴，轻轻摇动玻片3~5min后观察结果，记录各标本有无凝集现象。【实验结果】孕妇尿格呈均匀浑浊乳状液，无凝集，妊娠试验阳性；正常尿格出现白色细小凝集物，随时间延长凝集物变成小块状，妊娠试验

6、阴性。待检尿若为乳状液，妊娠试验阳性；若出现凝集，则妊娠试验阴性。【注意事项】1．试验所用诊断试剂用前应充分摇匀，而且应在有效期内使用。2．加样用的滴管及混匀用的牙签不能共用。3．加样不宜太多，玻片应始终保持水平，以防两格之反应液相混。【实验思考】1．记录血型鉴定试验、乳胶妊娠诊断试验的材料、方法及结果判定（可用图示或表格方式表示）。2．直接凝集试验与间接凝集试验有何不同？3．在各凝集试验中都设有相应对照，有何意义？若对照出现异常如何分析及解决？沉淀反应【实验目的】1．掌握对流免疫电泳的基本原理、方法。2．熟悉琼脂单

7、向扩散，双向扩散的基本原理、方法、结果分析及临床用途。3．了解火箭免疫电泳的基本原理、方法。【概述】可溶性抗原如血清、毒素、细菌浸出液等与相应抗体结合，当两者比例合适、并有适量电解质存在时，形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线，称为沉淀反应。沉淀反应是临床上最常用、最基本的方法之一。它的种类较多，可分为琼脂扩散试验、免疫电泳试验、环状沉淀试验及絮状沉淀试验等。一、琼脂扩散试验利用可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂内进行扩散，当两者比例合适时，就出现白色沉淀线，为阳性反应。本试验可在试管内、平皿中以及玻片上的琼脂内进行操作。琼脂

8、扩散试验可分为单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验。(一)单向琼脂扩散试验(二)双向琼脂扩散实验二、对流免疫电泳【实验原理】带电的胶体颗粒可在电场中移动，移动方向与胶体颗粒所带电荷有关。多数蛋白质抗原在碱性缓冲液中带负电荷，在电泳时从负极向正极移动。抗体属球蛋白，在碱性缓冲液只带微弱的负电荷，而且相对分子质量较大，电泳力较小，在琼脂电渗力作用下反