Odyssey 红外荧光扫描成像系统培训手册1

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1、Odyssey红外荧光扫描成像系统培训手册二oo三年九月目录一、Odyssey红外成像系统技术特点二、系统安装条件三、Western实验所需试剂设备及样品四、培训程序及时间安排五、仪器及试剂系统介绍六、Western实验操作流程介绍七、软件使用培训八、常见问题处理九、注意事项一、Odyssey红外成像系统技术特点一般的荧光染料的激发和检测波长都位于可见光谱区，在此波长范围内，化学高分子物质（膜、胶、微孔塑料板等）也会发出荧光，因此易产生高背景的荧光干扰，从而不能有效用于膜上蛋白或者核酸的直接荧光成像。而在红外波长区这些大分子物质几乎不发出

2、任何荧光信号，使得红外荧光染料在长波下检测时背景荧光很低，具有很好的信噪比，这一特点使得核酸和蛋白的膜上荧光检测成为可能。LI-COR根据红外荧光的这一特点开发出Odyssey红外成像系统，独特的采用2个红外激光作为激发光源，以扫描成像方式对样品进行检测。样品载体可以是膜、凝胶和微孔板。该系统配置的2个红外激光激发光源，激发光波长分别为680nm和780nm，配置的2个高灵敏度光敏二极管可以分别检测720nm和820nm的发射荧光，因而Odyssey可同时检测两种IRDyes染料的荧光信号。IRDyes染料的最大吸收值与Odyssey的两

3、个红外激光器680nm和780nm激发波长相匹配，其发射光波长又与Odyssey的两个光敏二极管检测波长相匹配，与同时IRDye700和IRDye800的发射波长峰值相隔100nm，因此Odyssey可以给出最大的灵敏度和最小的信号交叉。同时由于采用二极管激光器和固态检测器，Odyssey具有很长的使用寿命（激光器使用寿命约4-6万小时），而系统维护的要求却很低。该系统可广泛应用于信号传导，蛋白磷酸化分析，In-Cell-Western分析等蛋白领域研究。主要特点1．高灵敏度,效果同于或者好于化学发光法，但不需信号放大步骤，信噪比高。2．

4、直接检测，无需曝光和显色底物，不需要X光片，不需要暗房，没有放射性废料产生。3．双色检测，可以在一次杂交中同时检测两种目的分子，直观，省时。4．宽广的线性范围，可用于高准确性定量。5．背景低，图像清晰，激光强度可调，不会丢失弱的信号6．强有力的软件支持，结果分析如确定分子量和定量及图象处理编辑很容易7．系统操作和维护简单Odyssey的应用应用领域：蛋白质研究，核酸研究具体包括：Western分析，In-GelWestern分析，蛋白质定量分析，双色磷酸化分析，考马司亮兰胶的扫描，蛋白双向电泳，双色EMSA，双色微孔板分析，BDPower

5、BlotAnalysis，NorthernBlot，SouthernBlot等二、系统安装条件1.位置要求：稳定水平的操作平台放置设备，远离热源，避免阳光直射2.空间及载重要求：操作平台尺寸（长×宽×高）：80×70×80cm操作平台载重：40kg3.温度要求：15-25℃4.湿度要求：不超过60%5.电源：90-250VAC，47-63Hz。6.其它：通用插头接线板（至少3个插孔）三、Western实验所需试剂设备及样品WesternBlot实验所需试剂耗材：客户自备的蛋白样品(建议为新鲜制备的蛋白，最好用western验证过)细胞裂解

6、液SDS-Page胶电泳缓冲液硝酸纤维素膜转移缓冲液PBSTBS封闭液（建议使用5%进口脱脂奶粉）Tween-20一抗荧光标记的二抗（IRDye700和IRDye800）锡箔纸（通用试剂详细配方请参照《分子克隆实验指南》）其它配套设备：1)蛋白电泳仪2)脱色摇床3)转膜仪4)分子生物学实验室常用工具：加样器，Tip头，量筒，离心管，离心机，冰盒等。四、培训程序及时间安排（请至少安排2名实验室长期工作人员参加培训，方便以后有人员变动您也能进行仪器内部培训。）1.仪器概况及相关应用讲座（1小时）2.仪器使用培训（2小时）3.用户实际操作练习与

7、答疑（1小时）五、仪器及试剂系统介绍1.Odyssey红外成像系统技术特点讲解2.仪器系统组成和工作原理讲解3.配套试剂介绍六．Western实验操作流程介绍荧光检测Western操作流程（以硝酸纤维素膜为例）：1.吸去培养液，用预冷的PBS洗细胞两次2.加入细胞裂解液，4℃放置20min3.用细胞铲刮下细胞，转移到1.5ml离心管，13000rpm，4℃，20min4.取上清5.取20-100µg蛋白进行电泳6.电泳：聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）按分子克隆实验手册操作7.硝酸纤维素膜于转移缓冲液（PBS）中平衡20min。（如果使用P

8、VDF膜，请先用甲醇浸湿，再用去离子水冲洗后转移到转移缓冲液中平衡20min。）8.电泳胶置转移缓冲液中平衡20min。9.裁两张与胶同样大小的滤纸,置转移缓冲液中平衡。10.转膜顺序：负极－