高效液相色谱分析技术-应用陈桂良

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1、高效液相色谱分析技术—应用上海市食品药品检验所陈桂良高效液相色谱法应用指导原则用于药品的杂质检查，主要检查原料及制剂中引入的杂质或降解产物，尤其是难于用TLC分离的性质相似的有关物质。用于原料药的含量测定，主要用于多组分或含有几种杂质，或因杂质干扰，常规方法又难以分离或分离手段繁杂的品种。用于制剂及复方制剂的含量测定，主要用于所含杂质或赋形剂干扰含量测定、需先经繁杂分离后才能测定、或各成分间相互干扰的品种。首选填料为十八烷基硅烷键合硅胶、硅胶及辛烷基硅胶。如经试用不适合时，再选用其他填料。首选国产分离柱，并应比较不同分离柱的理论板数。应选择适宜的通用性较强的分离往。流动相首选

2、甲醇-水系统，如经试用不适合时，再选用其他溶剂。为保护仪器，应尽可能少用含有缓冲液的流动相。内标物质应选择易得并不对测定方法产生干扰的物质，原料药的含量测定避免使用内标法。检测器首选UV检测器。用于药品的杂质检查时，应避免采用峰面积归一化法。枸橼酸氯米芬异构体照高效液相色谱法，用硅胶为填充剂，正已烷-氯仿-三乙胺（80:20:0.1）为流动相检测波长为302nm；理论板数按顺式异构体峰计算应不低于3000，顺、反式异构体峰的分离度应大于1.3。取本品加流动相制成每1ml中含0.10mg的溶液，取20µl注入液相色谱仪，记录色谱图，其保留时间依次为顺式异构体（E）与反式异构体（

3、Z），按峰面积归一法计算，供试品中含反式异构体应为30-50%。甲氨蝶呤含量测定照高效液相色谱法（附录××）测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-7.0%枸橼酸溶液-2.0%无水磷酸氢二钠溶液（10:10:80）为流动相，检测波长为302nm。理论板数按甲氨喋呤峰计算并不低于1000，甲氨蝶呤峰与叶酸峰的分离度应不小于8.0。测定法取本品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，精密量取10µl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取曾测定干燥失重的甲氨蝶呤对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。泼尼松龙含量测定照高

4、效液相色谱法（附录××）测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水（65:35）为流动相，检测波长为240nm。理论板数按泼尼松龙峰峰计算应不低于1000，泼尼松龙峰和内标物质峰的分离度应大于3.5。内标溶液的制备取块诺酮，加甲醇制成每1ml中含1.5mg的溶液,摇匀,即得。测定法取泼尼松龙对照品适量,精密称定,加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为对照品溶液;精密量取该溶液与内标溶液各5ml，置50ml量瓶中，用甲醇稀释成50ml，摇匀,取10µl注入液相色谱仪,记录色谱图；另取本品适量,同法测定,按内标法以峰面积计算，即得。H

5、PLC在药品质量控制中的应用鉴别杂质分析复方制剂分析含量测定对照品标定鉴别采用与对照品在相同条件下进行色谱分离并进行比较，要求其保留行为和检测结果都相互一致作为鉴别药品真伪的验证，是一个较好的方法；选用色谱法进行鉴别试验时，必须要求该色谱条件能保证其与同类药品有良好的分离，也就是主要有适应性试验的内容。取本品与盐酸去甲万古霉素标准品，分别加水制成每1ml中约含5mg的溶液，照去甲万古霉素含量项下的方法试验，供试品与标准品主峰的保留时间应一致。（盐酸去甲万古霉素）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的保留时间应与对照品峰的保留时间一致。（醋酸氟氢可的松软膏）空白试验空白试验是

6、指在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进行的试验。对照试验用已知含某类成分的中草药或纯品做阳性对照，以排除假阴性的出现杂质分析指导原则USP对法定标准中的杂质定义较详细；BP对杂质的确定和测定方法说明比较具体；ICH对新药和新制剂中的杂质也有文本介绍。任何影响药品纯度的物质均称为杂质。药品质量标准中的杂质系指在按照经国家有关药品监督管理部门依法审查批准的规定工艺和规定原辅料生产的药品中，由其生产工艺或原辅料带入的杂质，或经稳定性试验确证的在贮存过程中产生的降解产物。杂质定义质量标准中杂质检查项目的确定主要供新药的药学研究和质量标准建立参考；

7、新药中发现的表观含量在0.1%及以上的杂质和降解产物，以及毒性杂质，应进行定性或确定结构，即至少要确定化学类别。仿制药品和变更工艺或原辅料产生的新杂质，也应这样进行研究。质量标准中的杂质不包括掺入的或污染的外来物质，不包括变更生产工艺或变更原辅料而产生的新杂质。由于假劣药品的情况复杂，必要时采用非法定方法予以检测。检测对象药品生产企业变更生产工艺或原辅料，并因由此带进新的杂质对原质量标准的修订，均应依法向有关药品监督管理部门申报批准。由于杂质分类方法较多，难以统一规定。如USP的“普通杂质”，正文和通法