食品安全快速检测技术(I)

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1、生物技术---免疫学技术基本概念抗原（antigen）进入动物体内能刺激动物的免疫系统发生免疫应答，从而引起动物产生抗体或形成致敏淋巴细胞，并能和抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质分完全抗原和半抗原抗体(antibody)：抗原刺激动物免疫系统，由免疫系统产生分泌的能和相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白第三章免疫学技术--抗原抗体反应可对抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测抗体抗原以非共价键结合不可见反应：几秒-几分钟可见反应：数分钟（小时、日）影响因素电解质温度酸碱度第三章免疫学技术酶联免疫法放射免疫法将同位素分析的灵敏性和抗体抗原反应的特异性这

2、两大特点结合起来的免疫标记测定技术缺点：需特殊仪器设备;一定的防护条件;半衰期短及试验废物难以处理荧光免疫法以荧光素和罗丹明作为标记物，可在荧光显微镜下检查显示荧光的复合物和所在部位主要用于医学实践中各类病原微生物的快速诊断以及组织切片中特异抗体的检测其他胶体金标记第三章酶联免疫法（enzymeimmunoassay)以酶标记抗体或抗原进行的抗体抗原反应酶结合物应具有双功能：高度特异的免疫反应、生物催化放大作用基本方法间接法双抗体夹心法竞争法生物素-亲和素系统（biotin-avidinsystem，BAS）某些新进展酶联免疫吸附（enzymelink

3、edimmunosorbentassay）间接法1、将已知可溶性抗原吸附于载体2、温育后清洗3、加入可能含特异性抗体的待检液4、温育后清洗5、加入酶标记的二抗6、温育后清洗7、加入酶作用底物8、测定反应颜色深浅双抗体夹心法1、将已知抗体吸附于载体上2、温育后清洗3、加入可能含特异性抗原的待检液4、温育后清洗5、加入酶标记特异性抗体6、温育后清洗7、加入酶作用底物8、测定颜色反应深浅酶联免疫吸附（enzymelinkedimmunosorbentassay）竞争法1、将已知抗体吸附于载体上2、温育后清洗3、加入可能含特异性抗原的待检液和酶标记的已知抗原液

4、4、温育后清洗5、加入酶作用底物6、测定颜色反应深浅酶联免疫吸附（enzymelinkedimmunosorbentassay）生物素-亲和素系统（biotin-avidinsystem）基本概念生物素：是一种维生素H，经活化后，可与抗体、抗原、酶以多配一的方式共价结合，且不影响它们的活性亲和素：从卵蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，可与酶偶合，以1配多的方式对生物素有很强的亲和力BAS用于检测的基本方法：BAB法或BRAB法BA法ABC法酶联免疫吸附（enzymelinkedimmunosorbentassay）酶联免疫吸附（enzymelinkedimm

5、unosorbentassay）均相酶免疫测定法无需“固定在载体上”；无需“温育后清洗”斑点免疫结合试验以微孔薄膜为载体，酶免疫反应阳性结果在膜上出现色斑点胶体金标记较酶标记更为简便酶联免疫吸附（enzymelinkedimmunosorbentassay）猪肉和尿液盐酸克伦特罗的免疫胶体金法快速检测“瘦肉精”学名为盐酸克伦特罗，医学上又称克喘素，常用于治疗哮喘。由于盐酸克伦特罗添加于饲料饲喂动物后可明显促进动物生长,提高瘦肉率,所以养殖户称其为“瘦肉精”，曾在国内外广泛用于动物饲养生猪食用瘦肉精后皮毛光亮，呼吸急促，个别会出现腿抽搐，站不稳，爬坡困难

6、；宰后猪的肌肉特别鲜红，后臀肌肉饱满，肥肉非常薄瘦肉精介绍瘦肉精介绍“瘦肉精”化学性质特别稳定，加热到170℃时才能被分解，故一般家庭厨房加热不能将其分解破坏食用后在胃肠道吸收快，作用维持时间持久。中毒后主要症状表现为头疼、头晕、心悸、心慌、面色潮红、四肢发抖等症状违法者使用该物质以提高猪的瘦肉率和颜色鲜艳程度，不知情的市民错误地认为这样的肉才是“好肉”而特别喜欢选购《食品卫生法》《食品添加剂卫生管理办法》（GB2760）《动物性食品中兽药残留最高限量》（农业部公告第235号，2002年12月24日）规定：禁用药物，动物性食品中不得检出：瘦肉精、沙丁胺

7、醇、西马特罗等31种违法者的法律责任：民事赔偿、行政处罚、刑事处罚法律规定盐酸克伦特罗残留检测方法《动物性食品中克伦特罗残留量的测定》（GB5009.192-2003）第一法：气相色谱——质谱法，检出限：0.5ppb第二法：高效液相色谱法，检出限：0.5ppb第三法：酶联免疫法（ELISA筛选法），检出限：0.5ppb《动物组织中盐酸克伦特罗的测定——气相色谱/质谱法》（NY/T468－2006），检出限：2.0ppb《动物尿液中盐酸克伦特罗的测定——气相色谱/质谱法》（NY/XQ421－2003），检出限：1.0ppb《尿液中盐酸克仑特罗的测定胶体金

8、免疫层析法（NY/T933-2005），检出限：3.0ppb猪肉全程监控中瘦肉精检测方法的选择