蓝莓组培技术具体培养介绍

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1、蓝莓组培技术具体培养介绍一、愈伤组织的培养  （一）几个概念 1.外植体（explant）：从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。 2.分化（differentiation）：细胞在分裂过程中发生结构和功能上的改变，从而在个发育中形成各类组织和器官完成整个生活周期。 3.脱分化（dedifferentiation）:已分化好的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分化组织状态的过程。 4.再分化（redifferentiation）:脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。 5.愈伤组织（callus）:在离体培养过程中形成的具有分生能力

2、的一团不规则细胞，多在外植体切面上产生。 6.胚状体（embroid）:-对应于胚（embryo），在离体培养过程中产生一种形似胚（具有明显的根端和芽端），功能与胚相同的结构。胚状体原始细胞特征：原生质浓厚，细胞核较大，处于细胞质中央。 7.人工种子(artificial seed):指将植物离体培养产生的体细胞胚包埋在含有营养成分和保护功能的物质中,在适宜条件下发芽出苗的颗粒体。 （二）愈伤组织类型及特征 1.结构致密型：表面光滑有光泽，结构致密，多为淡黄色或白色，易于再生芽 2.结构松散型：多为白色，可以用于悬浮系建立。 3.胚性愈伤组织：具有产生胚状体能力。 （三）愈伤组织的形成：

3、大致经过起绐期、分裂期和形成期，但三个时期没严格界限。 1.起始期指细胞准备进行分裂的时期，当外植体已分化的活细胞在外源植物生长物质的作用下，通过脱分化起动而进入分裂和形成愈伤组织。 2.分裂期表现为外层细胞出现分裂，细胞分裂进入最旺盛时期，细胞体积最小，细胞核和核仁较大，RNA含量最高。 3.形成层的特征是细胞大小趋于稳定,细胞分裂从分裂期的周缘细胞分裂为主转向了内部组织。 （四）愈伤组织中的形态发生：愈伤组织通过再分化形成再生植株的方式主要有： 1.先产生芽后,在茎的基部长根。 2.先长根,再长芽。 3.愈伤组织的不同部位分别形成根和芽。 （五）胚状体特点 1. 有分化明显的生物两端

4、，根端和芽端。2.单细胞起源。3.发育程序同合子胚相似，也经过球形胚、心形胚、鱼雷胚、子叶胚。4.和周围细胞之间有隔离。5. 和培养物质没有维管束联系，所以容易从培养物质上剥离。6.可以在不附加任何激素的培养基上萌发。 （六）胚状体发生途径 1. 直接胚状体发生。2.间接胚状体发生（愈伤组织分化出胚状体）。3.从悬浮培养的细胞中诱导。4.由花粉产生的单倍体胚状体。5.由原生质体产生胚状体。 （七）胚状体异常现象 1. 单片子叶；2.多子叶；3.杯状胚状体；4.柱状胚状体。 二、器官培养     器官培养主要指植物根、叶、茎、花及小果实等器官在离体条件下的无菌培养。其特点在于能保持器官所具

5、有的特征结构。 1.根的培养(以番茄离体根培养为例) (1)种子用70%酒精消毒;(2)用饱和漂白液消毒10分钟;(3)用无菌水洗三次;(4)将6-10粒种子放入培养皿中的湿滤纸上;(5)培养皿放入暗中培养直至胚根长至30-40mm;(6)切取10mm长的根尖用无菌的接种环接种于培养液中;(7)在25度下培养直到长出侧根。   影响根分化的因素 培养基的成分：⑴基本培养基⑵生长调节物质⑶生长素⑷细胞分裂素 培养条件：⑴光经常抑制根生长⑵温度21－30℃均可诱导生根 2.茎的培养(可分为茎尖培养和茎段培养) 茎段培养是指带有腋(侧)芽或叶柄、长数厘米的茎节段进行离体培养。 培养流程： 3.

6、叶的培养 三、花药和花粉培养 （一）几个概念 单倍体细胞：植物的花粉母细胞经减数分裂形成的，其染色体数目只有体细胞的一半。 花粉和花药培养：指花粉在培养基上改变其正常发育和机能，不经受精而发生细胞分裂，由单个花粉发育成完整植株的技术。 单倍体植物：用离体培养花药的方法使其中的花粉发育在一个完整的植株。 （二）影响花粉和花药培养的因素有哪些? 1. 不同基因型对培养反应不同。2.材料的生理状态。3.发育阶段。4.培养基：⑴基本培养基⑵激素⑶蔗糖⑷其它：铁盐、活性炭。5.预处理：花蕾低温处理2－7天为宜，也可高温、辐射、黑暗处理。6.培养方式：固体培养、液体培养。 （三）什么时期花粉易单倍体

7、培养成功? 　　单核期小孢子。 （四）花药培养中非单倍体出现的原因有哪些? 1. 花药愈伤组织的多倍化－核内有丝分裂。2.核融合--产生多倍体。3.不正常的非单倍体花粉产生的植株。4.花药壁、花丝等二倍体体细胞参与愈伤组织的形成。5.愈伤组织染色体的变化。 （五）花药培养中花粉发育途径有哪些。 ⒈1.均等分裂发育途径，2.营养核分裂发育途径，3.生殖核分裂发育途径，4.营养核和生殖核发育途径。 （六）单倍体植株染色体加倍方法是什么?