细胞化学染色

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1、细胞化学染色检验前言细胞化学是细胞和化学相结合的一门科学。细胞化学染色是根据化学反应的原理，应用涂片染色的方法，观察细胞的化学成分及其变化的重要方法。在病理情况下，血细胞的化学成分可发生改变。因此，细胞化学染色不仅对研究血细胞的代谢活动、生理功能，而且对生理和病理情况下血细胞的化学成分的变化、各种类型血细胞的鉴别、某些血液病的鉴别诊断、疾病的疗效观察以及发病机制的探讨均有重要意义。研究血细胞的化学物质较多，如各种酶类、脂类、糖元、铁等。下面主要介绍血液学中常用的一些细胞化学染色方法。瑞氏染色法：瑞氏染色液的配制：瑞氏染料（粉）1g纯甲醇60ml将染料放在乳钵内加少量甲醇

2、研磨使染料溶解，然后将已溶解得倒入洁净的玻璃瓶内，剩下未溶解的再加少量甲醇研磨，如此继续操作，直到全部染料溶解及用完甲醇为止。制配好的染液保存于温室中一周便可应用。新鲜配制的染液偏碱性，放置后可呈酸性，染液储存愈久染色愈好。缓冲液的配制及其作用:1%KH2PO4(即1gKH2PO4+100ml蒸馏水)30ml1%Na2HPO420ml加蒸馏水至1000mlPH6.4~6.8过氧化物酶染色一、原理：细胞中的过氧化物酶（POX）分解底物过氧化氢（H2O2）产生新生态氧，后者使联苯胺氧化为联苯胺蓝沉淀而定位于POX活性部位。二、过氧化物酶染色法染液的配制：（1）联苯胺（Ben

3、zidine）0.3g95%乙醇（Ethyealcohol）99ml36%亚硝基铁氰化钠（SodiumNitroprusside）1ml(0.36g+1ml蒸馏水，置于37℃水浴箱中促溶。)（2）30%mlml过氧化氢溶液：30%双氧水，吸取一滴约0.05ml放入50ml蒸馏水内，每次用时必须新鲜配制。三、结果判断：细胞质中有蓝色颗粒的为阳性细胞。四、临床意义：粒细胞中除早期原粒细胞呈阴性反应外，晚期原粒细胞及以后各阶段粒细胞均呈阳性反应，细胞越成熟反应越强。单核系细胞：原单核细胞呈阴性反应，幼单核细胞及成熟单核细胞多呈弱阳性反应。淋巴系．巨核系．红系细胞均呈阴性反应。

4、POX反应主要用于白血病的鉴别。（一）过氧化物酶染色阳性急性原粒细胞性白血病（M1、M2型）、急性早幼粒细胞性白血病（M3型）急性粒单细胞性白血病（M4型）、急性单核细胞性白血病（M5型）、急性红白血病（M6型）均可呈阳性反应，阳性率＞3%。M3型阳性反应最强，M5型反应最弱。（二）过氧化物酶染色阴性急性淋巴细胞性白血病、急性巨核细胞性白血病（M7型）成阴性反应。阳性率＜3%。部分M1型、M5a型可呈阴性反应，M6型的幼红细胞成阴性反应。中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）染色一、原理：细胞内碱性磷酸酶能分解磷酸萘酚AS-BI为磷酸和芳基萘酰胺，后者与重氮盐（固兰BB）偶联，

5、形成不溶性的兰色沉淀物。二、试剂：1、固定液：甲醇（AR）甲醛固定液.配方：45ml甲醇加5ml甲醛，混匀，置4℃冰箱备用。2、缓冲液（NAPbuffer）：1.05g2-氨基-甲基-1，3丙二醇，加蒸馏水至50ml，再加0.1MHcl10ml,再加蒸馏水至200ml，混匀，放4℃冰箱备用。3、磷酸萘酚AS-BI贮存液：磷酸萘酚AS-BI30mg，加二甲基甲酰胺0.5ml，放0℃以下冰箱备用。4、染色应用液：缓冲液5ml，加磷酸萘酚AS-BI贮存液25ml，再加固兰BB5mg，混匀，使溶解，然后过滤待用。5、复染液：1%核固红溶液。配方：25克硫酸铝加500ml蒸馏水配

6、成5%硫酸铝。1克核固红加100ml5%硫酸铝配成1%核固红。三、方法：1、血片或骨髓片自然干燥后，入固定液（4℃）30秒立即取出，蒸馏水冲洗，晾干。2、在室温下，滴加染色应用液，染色15分钟，自来水冲洗，晾干。3、入1.0%核固红复染液10-15分钟，流水冲洗，晾干镜检。四、结果判定：正常血细胞的染色反应碱性磷酸酶主要存在于中性粒细胞，除巨噬细胞可呈阳性反应外，其他血细胞均呈阴性反应。结果应根据成熟中性粒细胞胞浆内兰色颗粒所占胞浆面积，颗粒大小，颗粒多少及染色强度来判断，阴性为胞浆内无兰色颗粒。1、分级标准：级别兰色颗粒占胞浆面积（%）颗粒大小颗粒多少染色强度+＜50

7、小小很少微弱-中等++50-80小-中等少等-中等中等-强+++80-100中等-大中等-多强++++100中等和大很多（密集、甚至覆于核上）很强2、量的表示：阳性率（%）、积分3、正常值：正常人一般阳性率＜40%，以“+”阳性反应为主，阳性积分40-100。判定结果时，在油镜下，计数100个成熟的中性粒细胞（包括中性分叶核粒细胞和中性杆状核粒细胞），计算阳性率。分为+~++++，+为1分，++为2分，依次类推，分数乘以各自细胞数，即为总积分。如：+10个，++13个，+++5个，++++2个，则积分为1*10+13*2+5*3+4*2=