生技整理考试重点

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1、说明：1、资料中未按名词解释、简答等的次序排版，如有需要，大家自行解决。2、有些细节，大家自己去看课件补充吧3、愿大家顺利。一、基因工程本章总体思路1、生物技术：包括基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程、蛋白质工程2、基因工程：在体外对DNA进行切割、拼接,使遗传物质重新组合,经载体转移到细胞中扩增表达,获得人类所需产品,或组建新生物类型的技术。3、基因工程诞生的理论基础：DNA是遗传物质；DNA双螺旋结构；中心法则和遗传密码4、基因工程诞生的技术突破：DNA分子的体外切割与连接技术DNA分子的核酸序列分析技术5、基因工程元年

2、：1973年6、基因工程的特征：1.跨物种性：外源基因到另一种不同的生物细胞内进行繁殖2、无性扩增：外源DNA在寄主细胞内可大量扩增和高水平表达。1.1工具酶7、工具酶：（以下为常用工具酶）工具酶功能限制性核酸内切酶识别特异序列，切割DNADNA连接酶催化DNA中相邻的5´磷酸基和3´羟基末端之间形成磷酸二酯键，使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接DNA聚合酶Ⅰ①合成双链cDNA分子或片段连接②缺口平移制作高比活探针③DNA序列分析④填补3´末端反转录酶①合成cDNA②替代DNA聚合酶I进行填补，标记或DNA序列分析（

3、含义：以RNA为模板合成DNA的DNA聚合酶）多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5´羟基末端磷酸化，或标记探针末端转移酶在3´羟基末端进行同质多聚物加尾（1、探针标记2、在载体和待克隆的片段上形成同聚物尾，以便于进行连接）碱性磷酸酶切除末端磷酸基（制备载体时，用碱性磷酸酶处理后，可防止载体自身连接）8、限制性核酸内切酶(restrictionendonuclease,RE)：是一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列,并在合适的反应条件下使每条链一定位点上的磷酸二酯键断开，产生具有3’-OH基团和5’-磷酸基团的DNA片段的内切脱氧核糖

4、核酸酶。分类:包括限制性核酸内切酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ（基因工程技术中常用Ⅱ型）作用：与甲基化酶共同构成细菌的限制修饰系统，限制外源DNA，保护自身DNA。9、平末端(bluntend):DNA的两条链在同一位置被切开，产生末端长度相等的DNA片段，即平末端。粘末端(stickyend)：DNA分子的两条链在不同的位置（中间隔2-4核苷酸）被切开，形成一条交错的伤口，所得的DNA片段在末端都具有短的悬垂部分，即粘末端。10、同裂酶：来源不同的限制性内切酶，但能识别和切割同一位点，这些酶称同裂酶。同尾酶：有些限制性内切酶虽然识别序列不完全

5、相同，但切割DNA后，产生相同的粘性末端，称为同尾酶。这两个相同的粘性末端称为配伍未端(compatibleend)。11、DNA连接酶的连接方式：1、粘性末端连接2、平端连接3.末端修饰后进行连接4.人工接头连接1.2载体(vector)12、载体：是指能在连接酶作用下和外源DNA片段连接，实现外源DNA的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的DNA分子13、理想载体的基本条件：1、可转移性2、具有安全性3、合适的复制位点4、多克隆位点：广泛、特异5、选择标志，便于筛选和鉴定6、分子较小，可容纳较大的外源DNA14、质粒：存在

6、于细菌染色体外的小型共价闭合环状DNA分子。要求：含有复制起点；含有多克隆位点（MCS）；含有筛选标记；高拷贝数；分子量小；易于导入宿主细胞15、T-克隆载体：5’端带一个不配对的碱基T，这样的线性质粒可将PCR产物以TA配对连接的方式直接进行克隆，即TA克隆。用于TA克隆的载体被称为T-克隆载体U-克隆载体：5’端带一个不配对的碱基U的线性质粒称为U-克隆载体16、λ噬菌体克隆载体优点：①其分子遗传学背景十分清楚；②载体容量较大，能容纳大约23kb的外源DNA片段；③具有较高的感染效率，其感染宿主细胞的效率几乎可达100%。

7、λ噬菌体分类;(1)插入型载体（insertvector）：其限制酶位点可用于外源DNA的插入(2)取代型载体（replacementvector）：具有成对限制酶位点，外源DNA可取代两个限制位点上的DNA区段。重组DNA与包装蛋白混合，可在体外包装成有感染力的重组噬菌体颗粒λ噬菌体应用：包装范围:36.4Kb--51.5kb•转导效率:lμg重组DNA分子获得10个以上的噬菌斑.用途:建立cDNA基因文库,克隆外源目的基因。17、酵母人工染色体(YAC)把酵母染色体与基因复制和表达有关的主要组件都组装在质粒上，令质粒行使酵

8、母的转录功能和复制功能。特点:能容纳长达1000kb--3000kb的外源DNA片段用途:构建基因组文库，基因治疗和基因功能鉴定。18、表达载体（expressingvector）表达载体是用来在受体细胞中表达外源基因的载体。表达载体常由克隆载体改造而来。1.3目的基因20、