07 实验六 微生物菌种保藏技术

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1、实验七微生物菌种保藏技术一、目的要求二、基本原理三、器材四、操作步骤五、实验报告一、目的要求1、学习和掌握四大类微生物菌种保藏的基本原理，比较几种不同的菌种保藏方法。二、基本原理微生物个体微小、代谢活跃、生长繁殖快，如果保存不妥容易发生变异，被其他杂菌污染，甚至导致微生物细胞死亡。微生物菌种的长期保藏对任何微生物学工作者都是很重要的，也是非常必要的。自19世纪末F.Kral开始尝试微生物菌种保藏以来，已经建立了许多长期保藏菌种的方法。虽不同的方法原理各异，但基本原则是使微生物的新陈代谢处于最低或几乎停止的状态。保藏方

2、法通常基于温度、水分、通气、营养和渗透压等方面的考虑。菌种保藏方法：1、传代培养法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。2、悬液法将细菌细胞悬浮在一定的溶液中，包括蒸馏水、蔗糖、葡萄糖等糖液、磷酸缓冲液、食盐水等，有的还是用稀琼脂。悬液法操作简便，效果较好，有的酵母菌、细菌可以保存几年甚至近十年。3、载体法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、真空干燥法这类方法包括冷冻真空干燥法

3、和L-干燥法。前者是将要保藏的微生物样品预先经过低温预冻，然后在低温状态下进行减压干燥，后则则不需要低温预冻样品，只是使样品维持在10~20℃范围内进行真空干燥。5、冷冻法菌种枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、黑曲霉、细黄链霉菌2、培养基牛肉膏蛋白胨培养基、20%蔗糖悬液、麸皮培养基、沙土管等3、仪器或其他用具三、器材1、菌种活化四、操作步骤2、传代培养法（细菌）：牛肉膏斜面牛肉膏蛋白胨琼脂培养基斜面，1支/人，4-5ml/支。3、沙土管法（放线菌）：取河沙加入10%浓度的盐酸漂洗，加热煮沸30分钟，除去有机质。自来水冲洗至中

4、性，烘干后用40目筛子过筛，弃去粗颗粒，备用。准备：1支/人。4、蔗糖悬液法（酵母菌）：50ml蒸馏水+10g蔗糖，溶解，分装至15×150试管中，2ml/管。1支/人。5、载体法（霉菌）：麦麸培养基取20g麦麸+20ml水，拌匀，制成含水量为50%的麦麸培养基。1支/人。保存处理⑴斜面冰箱保存法：斜面，37℃培养24小时，转入4℃冰箱冷藏保存。保存期3~6个月。⑵沙土管：每支砂管加入0.2ml菌悬液，用接种环搅拌均匀。把砂管放入干燥器内干燥24小时后，封口，在4℃冰箱或者室温干燥处保存。每隔3个月测定一次活性。保存

5、期1~5年。⑶蔗糖悬液保存：每支蔗糖管加入0.2ml菌悬液，混合均匀。把蔗糖管封口，在4℃冰箱暗处保存。每隔一年测定一次活性。保存期5~10年。⑷麦麸保存法每支麦麸管加入0.2ml菌悬液，混合均匀，尽量捣匀小试管中的麦麸，呈疏松状态。30℃培养72小时，待菌丝长好后，放置在干燥器内干燥，在4℃冰箱或室温保存。每隔一年测定一次活性。保存期1~5年。1、思考题（1）根据你自己的试验，谈谈1~2种微生物菌种保藏方法的利弊？五、实验报告