血清谷丙转氨酶测定

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1、血清中谷丙转氨酶的活力测定【目的要求】1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作方法。3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。原理转氨作用：将α-氨基酸的氨基通过酶促作用转移到α-酮基上，生成相应的酮酸与氨基酸的反应。催化这一反应的酶称为转氨酶。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中，谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）的活性均较高。在正常的新陈代谢过程中，血清内两种酶维持一定水平的转氨酶活性（即正常值）。谷丙转氨酶glutamic-pyruvictransminase

2、GPT谷草转氨酶glutamicoxaloacetictransaminaseGOT当肝、心、肾等组织发生病变时，由于组织细胞肿胀、坏死导致大量的酶释放到血流中，从而引起血清谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶(GOT)活性显著升高。因此测定这些酶的活性对某些疾病的临床诊断具有重要的参考价值。本试验用丙氨酸和α-酮戊二酸为底物(基质液成分)经血清谷丙转氨酶作用生成谷氨酸及丙酮酸。丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与

3、丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT的活性。反应过程如下：0COOHCOCH3NO2H2NHNNO2COOHCCH3NO2NHNNO2+丙酮酸-2，4-二硝基苯腙棕红色，520nm处具特征光吸收，颜色深浅（OD520值）与丙酮酸含量成正比，可据此进行比色测定。2，4-二硝基苯肼COOHCNH2CH3COOHCO(CH2)2COOHCOOHCOCH3COOHCNH2(CH2)2COOH++谷丙转氨酶AlaGluα-KG丙酮酸King氏法谷丙转氨酶活

4、性单位：每毫升血清在37℃与pH7.4的基质液作用60分钟，生成1umol丙酮酸为一个活力单位。临床检验取血清量为0.1，报告数据以100ml血清计算，因此实际侧得结果乘1000即可。实验材料及试剂实验材料：动物或人血清实验试剂：丙酮酸标准液要求临用前配制；四、实验操作标准曲线的绘制试剂管号012345丙酮酸标准液，ml基质液溶液，ml磷酸缓冲液，ml相当于酶活力卡门氏单位0.000.500.1000.050.450.10280.100.400.10570.150.350.10970.200.300.101500.250.250.1

5、02002,4-二硝基苯肼ml0.500.500.500.500.500.5037℃水浴保温20min氢氧化钠ml5.05.05.05.05.05.0室温下静置10min0号管调零，于520nm处测吸光度GPT活力测定：洁净干燥试管2支，即测定管、对照管各1支试剂测定管对照管血清，ml基质液溶液，ml0.10.5----0.537℃水浴30min2,4-二硝基苯肼溶液，ml血清，ml0.5____0.50.137℃水浴20min0.4mol/L氢氧化钠溶液，ml5.05.0室温下静置10min，对照管调零，于520nm处测吸光度⑴、

6、标准曲线的制作以表1中的A520为纵坐标，酶活性单位为横坐标，绘制标准曲线。⑵、样品中转氨酶活性的计算根据样品管的A520查标准曲线，即得每100ml血清转氨酶的活性单位数。注意事项1.2，4-二硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙2.吸量应准确，严格控制反应时间和温度。3.在测定GPT活力时，应事先将底物、血清在37℃水浴中恒温4.溶血标本不宜采用，因血细胞内转氨酶活力较高，影响测定结果。5．在测定时，如酶活力较大（大于100单位），应将样品稀释后再进行测定。