Exp02 DNA浓度与纯度的测定

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1、实验二DNA浓度与纯度的测定一、实验目的1.掌握分光光度法检测DNA的纯/浓度2.学习凝胶电泳法检测DNA的质量1.紫外检测原理苯环结构AbsorT%光谱扫描定量测定二、实验原理DNA浓度的估算dsDNA(g/ml)=50(OD260)倍数ssDNA(g/ml)=33(OD260)倍数dsDNA(1g/ml):OD260＝0.02OD260＝150g/mlRNA(g/ml)=40(OD260)倍数RNA浓度的估算DNA:A260/A280=1.8,＞1.8RNA:A260/A280=2.0残留酚(270nm)、蛋白核酸纯度的判断2.琼脂糖凝胶电泳法电荷效应分子筛

2、凝胶浓度低电压影响DNA迁移率的因素DNA分子大小与构型琼脂糖的浓度与质量电压大小(＜5V/cm)缓冲液pHEB检测原理结合量与DNA大小和含量三、实验材料、设备及耗材E.cDNA提取液50TAE:2mol/LTris碱,1mol/L乙酸,50mmol/LEDTA(pH8.0)EB:母液(1mg/ml),工作液(1g/ml)6上样缓冲液Marker:DNAHindⅢ(50ng/l)实验用具及耗材TU-1901、石英比色杯、旋涡振荡器凝胶电泳系统、凝胶成像系统移液器(10、20、200l)、吸头及EP管四、实验步骤TEbuffer稀释:100、200旋涡振荡,混匀,离心预热

3、15minCK:400lTE,校零样品测试,A260、A2801.紫外检测2.琼脂糖凝胶电泳配胶(0.8%)→溶解→灌胶1TAE电泳缓冲液DNA样品+1l上样液3lMarker+1l上样液100V,20EB染色(1g/ml),20凝胶成像系统观察注意事项仪器操作比色杯使用琼脂糖彻底溶解防止凝胶穿刺减小EB污染五、作业P81思考题:2、4；P132思考题:2提取DNA纯度是否合乎要求？浓度多少？