三聚氰胺检测中样品前处理方法的比较

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1、三聚氰胺检测中样品前处理方法的比较ade分析方法美国FDA方法农业部行业标准国家乳制品质检中心艾杰尔公司方法瓦里安公司方法bcNY/T1372-2007GR/T0004-2008方法简称方法A方法B方法C方法D方法E样品及用量5g均浆样品5g饲料5g试样5g饲料或10mL牛奶5g奶粉或10mL牛奶萃取24mL乙腈/水（50:50），150mL三氯乙酸（1%），2方法一、50mL三氯乙酸，50mL1%三氯乙酸，2mL24mL乙腈/水溶液mL1.0MHCl，振荡30mL乙酸铅（2%），超声波超声波振荡萃取30min。加乙酸铅

2、（2%），超声20（50:50,v/v），1mL1.0sec，蜗旋振荡1min。4000振荡萃取20min，静止25mL乙酸锌（2%），用三min。取部分液体8000rpmM盐酸，振荡30sec，蜗orpm，5C离心5min。吸取min。取上层提取液约30氯乙酸溶液定容100mL，离心10min。取上清液供旋振荡1min，4000o上层水相5mL于离心管mL转入离心试管，10000滤纸过滤。SPE萃取。rpm，5C离心5min。中，加10mL二氯甲烷，振rpm离心5min。方法二、50mL50%乙腈水0.45μm过滤。o

3、荡2min，4000rpm，5C溶液，超声波振荡萃取30离心5min。取上层水溶液min。用0.1M盐酸定容至2.5mL与试管中。加2.5100mL，滤纸过滤。mL水于二氯甲烷试管中再萃取一次，离心后吸取水溶液，并与前面的水溶液合并，混合均匀。固相萃取净化固相萃取柱WatersOasisMCX混合型阳离子交换柱混合型阳离子交换柱CleanetPCXBondElutPlexaPCX150mg/6mL60mg/3mL200mg/6mL萃取柱预处理5mL甲醇，5mL水3mL甲醇，3mL水3mL水，3mL甲醇3mL甲醇，3mL水

4、5mL甲醇，5mL水样品过柱上述样品过柱，无真空10mL离心液过柱，1mL滤液过柱3mL萃取液上述清液过柱，重力1mL/min萃取柱洗涤5mL0.1M盐酸，2mL甲3mL水，3mL甲醇3mL甲醇，3mL水3mL水，3mL甲醇5mL0.1M盐酸，2mL甲醇醇萃取柱干燥真空1min真空抽干真空干燥真空干燥真空干燥三聚氰胺洗脱5mL5%氢氧化铵/甲醇3mL氨水/甲醇（5:100）3mL氨水/甲醇5mL5%氨化甲醇(v/v)5mL5%氨化甲醇（v/v）浓缩/再溶解ooooo浓缩55C氮气氛至干50C氮气氛吹干50C旋蒸至干50C

5、氮气氛吹干50C氮气氛干燥20min，再溶解乙腈/20nM甲酸（95:5）定20%甲醇溶液定容20%甲醇溶液定容至1mL20%甲醇溶液定容至2mL95:5乙腈:甲酸铵（20容至1.0mL，蜗旋10secmM）定容至1mL,蜗旋10sec过滤0.2μm尼龙滤膜0.45μm尼龙滤膜0.45μm尼龙滤膜0.45μm尼龙滤膜分析LC-MS-MSHPLC-DADHPLC-UV240nmHPLC-UVLC-MS-MS或BSTFA衍生化后GC-MS或BSTFA衍生化后GC-MS前处理方法比较上述五个方法中，按照时间先后，最早是方法A，

6、其次是方法B、方法D、再其次是方法C和D。其中方法D除了采用瓦里安的固相萃取柱外，其萃取及净化方法与方法A完全相同。应该说，其他方法都是基于方法A产生的。萃取方法：在上述六种萃取方法中（其中方法C有两种萃取方法），除了方法C中的萃取方法二，其余都是将三氯氰胺萃取至酸性水溶液中。而方法C中的萃取方法二是先进行中性萃取，然后再将萃取溶液调节至酸性。三聚氰胺属于弱碱性化合物，根据美国国家药学图书馆（UnitedStatesNationalLibraryofMedicine）的数据，其pKa=5。因此，应该在酸性条件下(pH≤3

7、，pH至少低于三聚氰胺pKa两个pH单位)将三聚氰胺萃取至水溶液中。由于在三聚氰胺在酸性条件下呈阳离子状态，便于固相萃取净化时采用阳离子交换柱吸附。方法B、C、D中均加入了乙酸盐，与三氯乙酸形成缓冲溶液，以减少pH的波动。固相萃取净化：上述五种方法中，固相萃取净化采用的均为混合型阳离子交换柱，其中方法A、D、E中采用的均为高聚物为基质的亲水-亲脂混合型阳离子交换柱。OasisMCX和CleanetPCX柱的阳离子功能团为苯磺酸基，BondElutPlexaPCX柱的阳离子交换功能团属性无数据可查。苯磺酸基属于强阳离子交换

8、功能团，在任何pH条件下都呈带负电荷的阴离子。因此，只要控制样品溶液的pH使三聚氰胺呈阳离子状态，就能够被苯磺酸基通过离子交换方式吸附。而在上述溶液萃取中，三聚氰胺已经是在酸性条件下，所以是呈阳离子状态，可以被苯磺酸基吸附。方法B、C并没有说明混合型阳离子柱中的阳离子交换剂是强阳离子交换剂还是弱阳离子交换剂。由于三聚