精液稀释：不同方法的比较

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1、精液稀释：不同方法的比较作者：W.E.MorganMorrow，北卡罗莱纳大学－在所有种公猪管理当中，良好的精液处理措施都是非常重要的一环。“预稀释”则是最近逐渐受到重视的一项措施，就是在精液稀释的过程中先加少量稀释剂，然后再加入全部稀释剂。e>DrMorganMorrow猪兽医专家编注在最近加拿大多伦多举行的美国猪兽医年会上，DeborahMurray和明尼苏达大学的三个同事DarwinReicks博士、ChrisKuster博士和BobMorrison博士对经过预稀释的精液和未经预稀释的精液进行

2、了对比。以下是他们的研究报告。介绍种公猪精液预稀释的目的主要是为了减轻精子的冷休克。影响精子功能的因素包括采精温度、存储温度和悬浮媒介1。精液温度如果突然从体温降至15℃以下，就会出现冷休克，精子活力会降低2，可另一方面精液采集之后又必须尽快稀释。另外，预稀释情况下先加入少量（100ml）稀释液，然后再加入全部稀释液，让渗透压有一个逐渐变化的过程。预稀释会让新鲜精液迅速获得抗生素的保护。一般公猪精液当中都含有细菌，浓度最高可达到1093cfu/ml。然而，预稀释需要花费更多的时间。与预稀释相比，一次

3、性全部稀释可节省时间，而且只需操作一次，错误操作的风险较低。本研究的目的就是要搞清楚，在授精效果方面，预稀释处理的精液与未经预稀释的精液之间是否存在显著的差异。材料与方法试验精液采自69头相同环境下饲养的不同日龄的杂交终端公猪。用徒手带橡胶手套进行采精，精液采入3.8升的塑料采集袋中，采集袋置于预热过的杯子里，袋内装有纱布过滤器。对精液进行称重，根据重量来估计一次射精的精子数。对盛放精液的塑料袋进行按摩（为了使样品均匀一致），用吸管吸取一滴精液到预热过的载玻片上，置于相衬显微镜下检查精子的活力。根据

4、精子活力将精液评定为合格或不合格。如果不合格，就将精液弃置。用移液管吸取100微升精液，置于2.4ml柠檬酸钠溶液中，混合均匀，然后用多通道显微红外快速成像系统（IMVMicroreader）来检查精子浓度。对样品中形态异常的精子进行计数（数25格），根据异常精子的比例对精子浓度进行了校正。校正过程不考虑附着原生质滴的精子比例。根据校正过的精子浓度，决定该次射精的精液可分成多少份授精剂数，以及总稀释容积应为多少。然后对公猪号、采精人员、采精总容积、每毫升精子数（百万）、尾部卷曲精子的比例（％）、附着

5、原生质滴的精子比例（％）、死亡精子比例（％）等情况进行记录。精液置于恒温装置中，维持在37℃。采精2分钟后，将精液取出恒温装置，等分为两份。一份加入100ml稀释液，标为E；另一份不加任何稀释液，标为O（表1）。之后将两份精液重新放回恒温装置。采精6分钟后，按计算好的稀释容积将两份精液完全稀释。分别从两份精液中各取一滴滴于载玻片上，置显微镜下检查精子活力。精子活力大于70％的为合格，小于70％的为不合格。如果E、O当中任何一份不合格，就将两份精液全部弃置。然后将2到5份完全稀释的精液按E组和O组混合

6、，再检查精子活力。然后用Cryovet自动包装机将混合后的精液包装好，贴上标签。经过预稀释的精液贴上红色标签，未经预稀释的精液贴上蓝色标签。包装好的精液在室温下冷却30至45分钟，然后转入16℃的环境中。表1:稀释剂分组和稀释时间E组1:2分钟时用100ml稀释剂预稀释2:6-8分钟时加入其余的稀释剂O组6-8分钟时加入全部稀释剂精液完全冷却之后，就可以拿到母猪场去授精了。从每份混合精液里流出一份样品，分别于24、48、72、96和120小时对样品进行测评。如果上述任何时间发现某份混合精液的品质不合

7、格，就通知母猪场，将该份精液弃置。精液被派发到5家母猪场（共计1,700头母猪），每家猪场接到的O组和E组精液剂数相同。各家猪场按自己的操作规程进行精液处理、发情检查，并对母猪进行人工授精。试验过程中各家猪场仅采用试验精液，直到试验精液用完为止。所有精液都在采集后5天之内用完。各猪场用相同剂数的O组和E组精液进行授精，双号的母猪用E组精液授精，单号母猪用O组精液授精。本试验中一共用了98份混合精液。统计分析研究开始之前，我们做了统计鉴定力分析，要想鉴定出分娩率上5％的区别，每个处理需要大约985头母

8、猪；要想鉴定出窝产仔数上0.5头/窝的区别，每个处理需要大约645窝（鉴定力＝0.80，置信概率＝0.05）。试验抽样为母猪。自变量为处理（也就是精液处理技术）。因变量为受胎率、分娩率和总窝产仔数。采用罗杰斯梯回归分析来检验不同处理对受胎率有无影响。对窝产仔数做了方差分析，对分娩率做了卡方分析。通过在窝产仔数和分娩率的分析当中加入适当的因子，可利用多重回归和罗杰斯梯回归来对结果的一致性进行验证。结果用经过预稀释的精液授精的母猪受胎率（87.7）与用未经过预稀释的精液授