分子生物学综合性大实验

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1、题目：分子生物学综合性大实验姓名：张珂彬学号：1300602043班级：2013高原生物学菁英班指导老师：段瑞君13目录前言21材料与方法21.1实验材料21.2实验试剂及仪器21.2.1DNA提取31.2.2PCR扩增DNA31.2.3PCR产物回收31.2.4重组质粒的连接31.2.5重组质粒的转化及蓝白斑筛选41.2.6质粒DNA抽提41.2.7DNA酶切41.2.8菌液PCR41.3研究方法与实验步骤51.3.1DNA提取（CTAB法）51.3.2琼脂糖凝胶电泳51.3.3PCR扩增DNA61.3.4

2、PCR产物回收71.3.5重组质粒的连接、转化与蓝白斑筛选71.3.6质粒DNA抽提91.3.7DNA酶切91.3.8菌液PCR92.结果与分析102.1植物基因组DNA的提取（CTAB法）102.2PCR基因扩增DNA102.3PCR产物的回收112.4重组质粒的连接、转化与蓝白斑筛选112.5质粒抽提与酶切122.6菌液PCR123结论1213前言青稞actin基因的克隆摘要：分子克隆是在体外对DNA分子按照既定的目的和方案进行人工重组，将重组分子导入到合适的受体细胞中，使其在细胞中扩增和繁殖，以获得DN

3、A分子大量复制，并是受体细胞获得新的遗传特征的过程。其基本原理是将编码某一多肽或蛋白质的基因（外源基因）组装到细菌质粒（质粒是细菌染色体外的双链环状DNA分子）中，再将这种质粒转入大肠杆菌体内，这样重组质粒就随大肠杆菌的增值而复制，从而表达出外源基因编码相应多肽或蛋白质。关键词:DNA提取、PCR基因扩增、连接、转化筛选、酶切Abstract:MolecularcloningofDNAmoleculesinvitroinaccordancewithestablishedobjectivesandprogram

4、sofartificialrecombination,therecombinantmoleculeintoanappropriaterecipientcelltoamplifyandmultiplyinthecellsinordertoobtainalargenumberofreplicationDNAmolecule,andItistheprocessofreceptorcellstoacquirenewgeneticcharacteristics.Thebasicprincipleisthegeneenc

5、odingapolypeptideorprotein(foreigngene)isassembledtothebacterialplasmid(double-strandedcircularDNAplasmidmoleculeoutsidethebacterialchromosome)inthisplasmidwasthentransformedintoEscherichiacoliinvivo,thustherecombinantplasmidtoreplicatewiththevalueoftheE.co

6、li,goouttoexpressthecorrespondinggeneencodesapolypeptideorprotein.Keywords:DNAextraction,PCRgeneamplification,ligation,transformationfiltering,digestion1材料与方法1.1实验材料青稞actin基因1.2实验试剂及仪器131.2.1DNA提取仪器试剂移液器及吸头1.5ml离心管陶瓷研钵水浴锅台式高速离心机。2%CTAB抽提缓冲溶液氯仿－异戊醇（24：1）异丙醇3

7、M的醋酸钠（pH5.2）无水乙醇、75%乙醇TE（10mmol/LTris·Cl，1mmol/LEDTA，pH8.0）缓冲液凝胶电泳上样缓冲液（0.4%溴酚蓝、50%蔗糖指示剂溶液）溴化乙锭溶液（剧毒）（10mg/ml溶液）1×TAE凝胶电泳缓冲液1.2.2PCR扩增DNA仪器试剂PCR热循环仪琼脂糖凝胶电泳系统吸头离心管1.0μΜ上游引物primerU1.0μM下游引物permerLDNA模板ddH2OMaxterMix1.2.3PCR产物回收仪器试剂琼脂糖凝胶电泳系统紫外观察分析仪（波长302nm）离心机

8、（Eppendoff）单面刀片TaKaRaAgaroseGelDNAPurificationKitVer.2.050×TAEDdH2O1.2.4重组质粒的连接仪器试剂恒温烘箱恒温水浴箱10×T4DNA连接酶BufferddH2O131.2.5重组质粒的转化及蓝白斑筛选仪器试剂恒温烘箱恒温水浴箱10×T4DNA连接酶BufferddH2O1.2.6质粒DNA抽提仪器试剂eppendorf管微量取液器(