Experimental Techniques

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1、AppendixD:ExperimentalTechniques        附录D:实验技术    Elucidatingthemolecularbasisoflifeisnoeasytask.  Ourcurrentunderstandingofcomplexprocesseslikereplication,transcriptionortranslationhasrequiredthousandsofscientistslaboringfordecades.  Yet,consideringthetinyscaleonwhichmolecularb

2、iologistswork,theamountknownisadmirable.  Thisunderstandingisduetoapowerfulsetoftechniques,toolsthatallowourimmensehandstocutandpastmolecules,andourblurryeyestopeerinsidecells.  Inthischapterwereviewthemostimportantofthesetechniquesusedtoday.        要弄清楚生命的分子基础并不是一件容易的事。我们现在了解的复杂过

3、程，如复制、转录或转译，是几千位科学家通过几十年的辛勤研究得来的。不过，考虑到分子生物学家工作的对象是如此微小，已获得的知识还是值得称道的。这样的理解得益于一套有效的技术，这是一些使我们的大手能够去切割并粘贴分子和使我们模糊的眼睛能够窥探细胞内部的工具。本章我们回顾现今使用的一些最重要的技术。    D.1  DNAManipulation    Techniques        D.1  DNA操作技术    D.1.1  GelElectrophoresisand    SouthernBlotting        D.1.1  凝胶电泳与    

4、Southern印迹法    GelelectrophoresisisatechniqueusedtoseparateamixtureofDNAmoleculesaccordingtolength(FigureD.1).DNAmoleculesarepulledthroughagelbyavoltagethatattractsthenegativechargesonphosphodiesterbonds.  Thegelisatangleofpolymersthatisquitedense,butcontainsholesthroughwhichDNAmo

5、leculescanpass.  Shortermoleculesfitmoreeasilythroughtheseholesthanlargermolecules;asaresult,thespeedatwhichaDNAmoleculemovesdownthegelisdirectlyrelatedtoitssize.        凝胶电泳是用来将DNA分子混合物根据它们的长度分开的技术（图D.1）。DNA分子的磷酸二酯键上带有负电荷，在电场作用下会在凝胶中发生移动。凝胶是一团密度较大但有孔的聚合物，DNA分子可以从孔中穿过。较小的分子比大分子更容易

6、进入这些孔；结果，一个DNA分子在凝胶中的移动速度直接与它的大小有关。    Afterthegelhasbeen‘run’forsometime,DNAmoleculesofdifferentlengthswilleachoccupydifferentplacesonthegel,appearingasindividualbands.  VeryfinegelscanbemadethatcanallowDNAmoleculestoberesolvedeveniftheydifferinlengthbyonlyonebasepair.  Notethatg

7、elelectrophoresisdoesnotdifferentiatemoleculesaccordingtosequence.  Twomoleculeswithdifferentsequencesbutwiththesamenumberofbasepairswillappearasonebandonagel.        在凝胶被‘跑’了一段时间以后，每种不同长度的DNA分子将在凝胶上占据不同的位置，呈现出不同的条带。甚至可以制备出很精细的凝胶用于分开长度只差一个碱基对的DNA分子。注意，凝胶电泳不能根据序列区分分子。具有相同长度但序列不同的两个

8、分子将出现在凝胶的同一个位置。    FigureD.1  DNA