中学生物实验中常用试剂的配制及作用

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1、中学生物实验中常用试剂的配制及作用徐以润（江苏省灌南高级中学江苏连云港222500）1.碘液配制：取2g碘化钾，溶解在5ml蒸馏水中，再加1g碘，待溶解后用蒸馏水稀释至300ml。溶液在光亮处容易变成紫色，必须保存在暗色玻璃瓶里。作用：用来测定淀粉，淀粉遇碘后，形成紫色的复合物。2.斐林试剂配制：斐林试剂(Fehling'ssolution)是德国化学家斐林（HermannvonFehling，1812年--1885年）在1849年发明的。斐林试剂斐林试剂A和斐林试剂B配制而成的。斐林试剂A是氢氧化钠的质量分数为0.1g/mL的溶液，斐林试剂B是硫酸铜的质量分数为0.

2、05g/mL的溶液。临用时斐林试剂A与斐林试剂B等量混合。作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。还原性糖与斐林试剂发生作用，水浴加热，生成砖红色沉淀。如用于鉴定组织液中是否有还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。3.班氏尿糖定性试剂配制：173克柠檬酸钠和100克无水碳酸钠溶解于800毫升水中。再取17.3克结晶硫酸铜溶解在100毫升水中，慢慢将此溶液加入上述溶液中，最后用水稀释到1升，边加边搅，如产生沉淀可滤去。作用：鉴定还原性糖，在沸水浴加热条件下与还原糖反应而生成砖红色的Cu2O沉淀，使用原理同斐林试剂，都是二价铜离子与醛基在沸水浴加

3、热条件下反应而生成砖红色的沉淀，所不同的是班氏试剂可长期使用。4.双缩脲试剂配制：双缩脲试剂（biuretreagent）是由双缩脲试剂A(NaOH)和双缩脲试剂B(CuSO4)两种试剂组成。双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1g/mL的水溶液；双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01g/mL的水溶液。作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。也可用于鉴定多肽。双缩脲试剂使用时，先向2mL蛋白质溶液加入2mL双缩脲试剂A，振荡摇匀，造成碱性的反应环境，然后再加入3~4滴双缩脲试剂B，振荡摇匀后观察现象。具体方法是先将双缩脲试剂A加入

4、组织样液，振荡均匀（必须营造碱性环境），再加入双缩脲试剂B，摇荡均匀。如果组织里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。5.苏丹Ⅲ染液配制：苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ干粉0.1g；95%酒精10ml；过滤后再加入10ml甘油。或者取0.1克苏丹Ⅲ，溶于20毫升95%酒精中，即成0.5%苏丹Ⅲ染液。作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。6.健那绿染色剂配制：配制质量分数为1%健那绿染液:将0.5g健那绿溶解于50m

5、L生理盐水中,加温到30-40摄氏度,使其充分溶解。作用：专一性用于线粒体染色的活细胞染料。将线粒体染成蓝绿色7.吡罗红甲基绿染色剂配制：①染色剂A液的两种配制方法3第一种方法：取吡罗红甲基绿粉1g，加入到100mL蒸馏水中溶解，然后用滤纸过滤，将滤液放入棕色瓶中备用。第二种方法：取甲基绿2g溶于98mL蒸馏水中，取吡罗红G5g溶于95mL蒸馏水中。取6mL甲基绿溶液和2mL吡罗红溶液加入到16mL蒸馏水中，即为A液，放入棕色瓶中备用。②染色剂B液的配制方法B液是一种缓冲液，由乙酸钠和乙酸混合而成。先取乙酸钠16.4g，用蒸馏水溶解至1000mL备用；再取乙酸12mL

6、，用蒸馏水稀释至1000mL备用。取配好的乙酸钠溶液30mL和稀释的乙酸20mL，加蒸馏水50mL，配成pH为4.8的B液（缓冲液）。③吡罗红甲基绿染色剂是由A液、B液混合配制而成的。取A液20mL和B液80mL混合，就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。应该注意的是该试剂应现用现配。作用：甲基绿可以给DNA染色，使DNA呈现绿色。吡罗红可以给RNA染色，使RNA呈现红色。8.质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液配制：30g蔗糖溶解于蒸馏水中，并稀释至100毫升。作用：观察成熟植物细胞质分离时用。经此处理细胞仍具活性。9.层析液配制：由20份石油醚（在60~900C下分馏

7、出来的）、2份丙酮和1份苯混合而成。代用品：93号汽油、95%的酒精溶液。作用：是一种脂溶性很强的有机溶剂，叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同：溶解度高的随层析液在滤纸上扩散很快；溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。10.解离液配制：质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液等量混合。作用：用于洋葱根尖的解离，能杀死细胞，并使组织中的细胞相互分离开来。11.染色体染色剂配制：质量浓度为0.01g/mL的龙胆紫溶液的配制；取1克龙胆紫，用少量蒸馏水溶解后，加蒸馏水，稀释到100毫升，保存在棕色瓶内。质量浓度为0.02g/mL醋酸洋红溶液的配制