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时间:2020-03-23
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1、1DEPC水(1‰)1000ml水1mlDEPC根据需要确定要配的体积,泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用,泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜,送至高压,然后配相关溶液。20.1Mtris(ph7.5)12.114gtris1000mlDEPC水用HCL调ph至7.5,高压备用。34%PFA的配制(ph7.0)40gPFA1000ml0.1mtris(DEPC水配制高压)将溶液持续加热至60℃左右,搅拌之至完全溶解,注意温度不要超过65℃,否则PFA降解失效。30.2%甘油/0.1Mtris20ml甘油980ml0.1Mtris420XSSCNacl1
2、75.3g(ph7.0)柠檬酸钠88.2gDEPC水1000ml分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用5HEPES溶液HEPES23.8g(ph6.8-8.0)DEPCH2O100ml650XDenhaldt′s液聚蔗糖(Ficoll400)0.2g聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone)0.2g牛血清蛋白(BSA)0.2gDEPC水20ml7预杂交bufferDeinoizedformanmid5ml20XSSC1.5ml1MHEPES0.5ml50XDenhanldt′s液1ml龟精DNA0.6ml(4ug/ul)DEPC水1.4ml龟精D
3、NA要先95℃10-15min加热变性,随即冰浴。杂交buffer分装后-20℃保存。8Washingbuffer(ph7.5)maleicacid5.8gNACL4.4gTween(吐温)1.5ml定容至500ml溶质浓度最后分别为0.1Mmaleicacid0.15Mnacl0.3%Tween9Maleicacidbuffer(ph7.5)Maleicacid5.8gNacl4.4g定容至500ml溶质的浓度最后分别为0.1Mmaleicacid0.15Mnacl10Detectionbuffer(ph9.5)0.1MTris-Hcl7.9g(9.0g)0.
4、1MNacl2.9g定容至500ml.使溶质的终浓度为0.1MTris-Hcl,0.1Mnacl.8blockingreagent(封闭液)(2-8℃保存)(bottle5)5gmaleicacidbuffer50ml9blockingsolution封闭液(新鲜配制)1mlMaleicacidbuffer10ml10抗体(AP)10000rpm离心5min,吸上清,1:5000稀释,考虑先稀释100倍,用时再稀释。²LB培养基胰化蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10gAmp(100ng/ml)1ml加去离子水950ml搅拌使之完全溶解,用5mol/L的NaOH
5、调PH值至7.0,定容至1L,高压蒸汽灭菌(15磅,1.034×105Pa)30min,4℃保存。²LB琼脂固体培养基LB500mL琼脂粉7.5g高压蒸汽灭菌(15磅,1.034×105Pa)30min,冷却至60℃,加入500mL100mg/mL的氨苄青霉素(Amp),分铺20个平板。²100mg/mL氨苄青霉素(Amp)Amp100mgddH2O1mL用0.2um滤器过滤,-20℃储存。²1M30mg/mL卡那霉素(kana)kana30mgddH2O1mL用0.2um滤器过滤,-20℃储存。琼脂糖凝胶电泳所用试剂²50×TAE(电泳缓冲液)Tris碱242
6、g冰乙酸57.1mL0.5MEDTA(pH8.0)100mL溶于终体积1000mL去离子水中,使用时1:50稀释。²10×加样缓冲液0.25%溴酚兰0.25%二甲苯青30%甘油保存于4℃。²10mg/mLEB溶液取溴化乙锭(EB)0.2g溶解于20mL去离子水中,混匀。4℃避光保存。使用时终浓度为0.5μg/mL。²1%琼脂糖凝胶琼脂糖1g1×TAE100mL微波炉加热至完全溶解,摇匀,当温度降至60℃时,即可铺制平板。ü0.1molCaCl2溶液:1.1g无水氯化钙,溶于90ml三蒸水中,定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌置于灭菌试剂瓶中,4℃保ü氨
7、苄青霉素(Amp)选择性培养基LB培养基中加入1.5%的琼脂(15g/L),高压灭菌20min,取出,在无菌条件下,冷却至50℃左右时(烧手但尚可忍受)加入抗生素或其他必需成分,如为氨苄青霉素(Amp)选择性培养基,则以50mg/ml的氨苄青霉素贮存液按50μg/ml的量加入,即每ml培养基加入1μl氨基苄。ü氨苄贮存液将氨苄青霉素钠溶于三蒸水,配成50mg/ml溶液,以0.22μm滤纸过滤,1ml一份分装,存于-20℃。质粒的少量提取【试剂及配制】1.溶液Ⅰ葡萄糖(C6H12O6·H2O)1.982g三蒸水160ml0.5molEDTApH8.04ml1mol
8、Tris-ClpH8.0
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