《免疫学方法技术》PPT课件

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1、第21章免疫学方法技术第一节基于Ag-Ab反应的检测方法抗原-抗体反应：指抗原与相应抗体在体内、外发生高度特异性结合反应。由于实验所用的抗体存在于血清中，故又称血清学反应（serologicalreaction)用于：抗原（微生物、细胞、激素、细胞因子、肿瘤标志物等）、抗体的检测。特异性抗原抗体反应的可见性适当的比例和浓度可逆性抗原抗体反应的特点应用1、利用已知抗原检测未知抗体（1）检测病原微生物的相应抗体以辅助诊断疾病：伤寒病、流行性乙型脑炎、AIDS病等。（2）检测自身抗体—诊断自身免疫病：SLE、类风湿性关节炎等。2、利用已知抗体检测未知抗原（1）鉴定病原菌：诊断疾病（2）检测肿瘤相

2、关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌（3）检测血型抗原、HLA抗原：鉴定血型，亲子鉴定（4）检测药物半抗原：确认运动员是否服用兴奋剂沉淀反应补体参与反应中和反应2341免疫标记凝集反应2435Ag-Ab反应的基本类型一、凝集反应（agglutinationreaction）概念：细菌、细胞等颗粒性抗原或包被有抗原的颗粒状物质（如聚苯乙烯乳胶等）与相应的抗体结合，出现肉眼可见的凝集团，称为凝集反应。1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。2、间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。细菌的鉴定和血型

3、的检查检测病原体可溶性抗原，病原体感染后产生的抗体二、沉淀反应（precipitation）概念：可溶性抗原（免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等）与相应抗体结合，形成不溶性免疫复合物，出现不透明的沉淀物。在液体中进行出现絮状沉淀，在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色的沉淀。1．单向免疫扩散(singleimmunodiffusion)2．双向免疫扩散(doubleimmunodiffusion)3．免疫电泳(immunoelectrophoresis)4．免疫比浊(immunonephelometry)1、单向免疫扩散（singleimmunodiffusion）：可溶性抗原在含相应抗体的琼脂凝

4、胶中进行的扩散，为一种半定量试验。环的直径与抗原含量成正相关2、双向免疫扩散（douleimmunodiffusion）：抗原与抗体在琼脂板中相互扩散而形成一定类型的沉淀线的方法。常用于抗原或抗体的定性检测、组成和两种抗原相关性分析。3、免疫电泳（immunoelectrophoresis）常用于血清蛋白种类分析，以观察Ig的异常增多或缺失。1）简易免疫电泳先将抗原样品在琼脂中进行电泳分离，可将蛋白质抗原分子分成不同的区带，然后将抗血清加入琼脂板横槽中，使二者进行双向扩散，当比例合适时即形成特异性的沉淀线，2）对流免疫电泳(counterimmunoelectrophoresis,CIEP)

5、是将双向免疫扩散与电泳相结合的一种技术3）火箭免疫电泳(rocketimmunoelectrophoresis)，抗原在电场下通过含有一定量抗体的琼脂凝胶，并于抗体发生反应，形成沉淀带。可定量分析。4、免疫比浊在一定量抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间形成免疫复合物，液体混浊。用浊度计测量反应体系的浊度，可绘制标准曲线并依据浊度推算样品中抗原含量。三、补体参与的反应溶菌反应细菌与相应Ab结合，可激活补体，使细菌溶解。主要发生于霍乱弧菌等G+菌，可用于细菌鉴定。溶血反应红细胞与相应抗体结合，通过激活补体使红细胞溶解，可作为补体结合试验的指示系统。补体结合反应是一种在补体参与的条件下，以绵羊

6、红细胞和溶血素作为指示系统来测定有无相应抗原或抗体的血清学试验。第二节免疫标记技术免疫标记技术（Immunolabellingtechnique）概念：用荧光素、同位素或酶等示踪物质标记抗体（或抗原）进行抗原-抗体反应。标记物质未改变抗原抗体的免疫学特性，同时标记物极大的提高了反应的灵敏度，可以对微量物质进行定量、定性或定位检测。免疫标记技术主要有三种基本类型：免疫荧光技术、免疫酶技术和同位素标记技术。荧光素：异硫氰酸荧光素（黄绿色荧光）、藻红蛋白、罗丹明（红色荧光）放射性同位素：125I、131I酶：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶免疫荧光检测法（IFA）放射免疫检测法（RIA）酶免疫检测法（E

7、IA）1．抗体制备。多克隆抗体单克隆抗体，2．标记物与标记方法。放射性同位素、酶、荧光分子、化学和生物发光系统。免疫分析基本环节3．分析方式设计：非竞争方式、竞争方式；直接法、间接法；标记抗原、标记抗体；均相、非均相4.信号检测。与相应的标记物对应。主要为分光光度法、荧光光度法、化学发光检测法。一、免疫荧光法(immunofluorescence,IF)概念：荧光素标记的抗体（抗原）与组织或细胞中的相