常见猪病检测方法

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1、猪病诊断技术规范一、致病性大肠杆菌的检测1引用标准参考NY/T555-2002（动物产品大肠杆菌、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法）。2范围适用于猪大肠杆菌病的诊断。3检测方法3.1材料3.1.1营养肉汤3.1.2营养琼脂3.1.3EMB3.1.4TSI3.1.5IMViC生化鉴定管3.1.6小白鼠3.2分离培养a)将采集的肝、脾、心血或肠内容物等分别接种伊红美兰琼脂平板（同时接种营养肉汤增菌备用），置37℃培养18~24h。b)观察培养特性，挑取黑色有金属光泽的菌落，用该菌落涂片，革兰氏染色，镜检。c)如可见到两端钝圆并多以单个存在的革兰氏阴性粗短杆菌，应取5~10个典型菌落再接种于

2、TSI琼脂。d)同时挑取典型菌落接种营养琼脂，37℃培养16~18h的菌液用于生化特性鉴定。3.3生化鉴定挑取上述菌落纯培养物接种以下生化培养基和乳糖发酵管，(36±1)℃培养24h后观察结果。3.3.1靛基质试验：a)滴加Kovacs氏靛基质试剂0.1mL于靛基质试验培养基中混合，观察结果。-28-a)出现红色环的为反应阳性；出现黄色环的为反应阴性。3.3.2甲基红（MR）试验a)滴加甲基红指示剂0.2mL于MR-VP培养基中混合，观察结果。b)出现红色为阳性反应；出现黄色为阴性反应。3.3.3VP试验a)滴加VP试剂甲液0.2mL于MR-VP培养基中混匀，再滴加VP试剂乙液0.1

3、mL混匀，静置，观察结果。b)在15min内出现红色的为阳性反应；无颜色变化的为阴性反应。阴性结果1h后再观察一次，出现红色也为阳性反应。3.3.4枸橼酸盐试验：观察培养基颜色变化，出现蓝色为阳性反应；不变色为阴性反应。3.4大肠杆菌鉴定结果应符合表1要求。表1大肠杆菌鉴定结果靛基质MRVP枸橼酸盐鉴定++--典型大肠埃希氏杆菌-+--非典型大肠埃希氏杆菌++-+典型柠檬酸盐杆菌-+-+非典型柠檬酸盐杆菌---+典型产气杆菌+--+非典型产气杆菌出现表1的生化反应类型时，如果为组织样品，由此可初步报告为致病性大肠杆菌。如果为粪便，尿液，饲料，饮水，应进一步做致病性试验。3.4致病性试

4、验a)取经营养肉汤37℃培养16~18h后的纯化菌株培养液，分别腹腔接种体重20g左右的小白鼠，每株接种2~3只，每只0.3mL（含菌量约为1×1012cfu／mL），同时用相同数量的小白鼠接种无菌肉汤作对照。b)饲养观察、记录死亡数，并从死亡鼠的心、肝中回收接种菌。在24小时内出现死亡的可报告为致病性大肠杆菌。-28-4药敏试验a)挑选琼脂平板上典型菌落接种营养肉汤培养中，37℃培养16~18h，菌液用于药敏试验。b)将肉汤培养物（用标准比浊管比较达相同浊度）稀释至含菌量为1×109cfu／mL，摇匀后蘸取菌悬液均匀涂布于琼脂平板上，然后用无菌镊子将药敏片贴附其上，每纸片2~5张，

5、置37℃培养24ｈ后观察。c)根据抑菌圈大小来判定其对药物的耐受性，选择敏感药物。二、沙门氏菌的检测1引用标准参考NY/T550-2002（动物和动物产品沙门氏菌检测方法）。2范围适用于猪沙门氏菌病的诊断。3检测方法3.1材料3.1.1SC3.1.2DHL3.1.3TSI3.1.4赖氨酸脱羧酶（LD）3.1.5邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷（DNPG）3.1.6甘露醇糖发酵管3.2分离培养a)采集疑似病例的肝、脾、心血或肠内容物样品。b)无菌剪取肝、脾样品1g，投入10mLSC增菌液中（血液、粪便样品可以采适量直接投入10mL增菌液），36±1℃培养18~24h。c)取一接种环增菌液划

6、线接种于DHL琼脂平板上，36±1℃培养18~24h。观察平板上菌落生长形态。沙门氏菌在DHL平板上呈无色半透明，产硫化氢（H2S），菌落中心黑色或几乎全黑色。-28-3.3生化鉴定a)挑取DHL平板上可疑菌落3~5个，每个菌落先洗入TSI培养基冷凝水中，继而在斜面上划线接种并高层穿刺接种。b)再挑取同一菌落依次接种氨基酸脱羧酶发酵试验（LD）和ONPG，甘露醇糖发酵管三支生化管，若菌落偏小，二次挑取菌落有困难，可用接种环醮取TSI培养基中冷凝水接种其余生化管，36±1℃培养18~24h（挑取菌落后的平板，应置于4℃冰箱保留48h以备复查）。c)按表1记录反应结果，对照表2进行判定。

7、d)凡符合表2生化反应模式，可报告为沙门氏菌。表1生化反应结果判定生化管TSILDONPGMAN底a斜面b硫化氢第一次颜色记录符合黄+黄+黑+紫+深黄+黄+第二次颜色记录符号红-红-无黑色-黄-无色或淡黄-紫-a“底”观察葡萄糖反应。b“斜面”观察乳糖和蔗糖反应。表2生化检测沙门氏菌属判定表序号TSILDONPGMAN判定底斜面硫化氢ABaCDbEcFdG++++++--+----+-++++---+++-+-+--++---++++++++-沙门氏菌亚种