实验二细胞结构和大小测量

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1、实验二细胞显微结构观察及大小测量一、目的与要求1、掌握光学显微镜下的细胞形态与结构特点、了解油镜观察自制标本操作方法2、了解制片技术的种类与用途3、初步掌握临时制片的方法与染色方法4、了解显微测微尺的使用方法5、学会利用软件处理细胞，求各细胞的大小和核质比二、试剂、材料与器材1、材料：洋葱，小白菜，新鲜的猪脑、番茄2、药品：0．1％亚甲基蓝染液，0．9％生理盐水，1％碘液3、器材：显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，滴管，擦镜纸，小刀，显微测微尺和电脑等三、操作与观察（一）制片方法与种类1、玻片分类：临时玻片标本与永久玻片标本2、制片方法的分类：装片法和切片法（二）临时玻片标本制备方法想一

2、想应该怎么制作？（三）永久玻片标本制备方法清洁玻片取材固定冲洗染色脱水封片（四）几种临时装片的制作1、洋葱鳞茎表皮细胞（染剂1％碘液或用0.1%亚甲基蓝液)清洁玻片取材滴生理盐水展平盖上盖玻片染色观察思考1、为什么说洋葱表皮细胞的形态结构特点与功能相适应？2、为什么用0.1%亚甲基蓝液染色？它使细胞结构中哪一部分更能观察清楚？3、如何使用高倍物镜？怎样调节显微镜才能更清楚的观察标本?4、怎样可避免标本中产生的气泡？2、植物的叶肉细胞和果肉细胞染剂：1％碘液清洁玻片取材滴生理盐水涂散开盖上盖玻片观察染色思考1）怎样制作植物叶肉细胞和果肉细胞？我们主要可观察到什么细胞器？2）想一想果肉细

3、胞与表皮细胞形态结构有什么不同？其最显著的特征是什么？3、人的口腔上皮细胞染剂：0．1％亚甲基蓝染液清洁玻片滴生理盐水轻刮两颊壁涂散开染色观察盖上盖玻片思考1）怎么制作人的口腔上皮细胞？关键在哪一步？2）比较洋葱表皮细胞和人的口腔上皮细胞结构上有何差别？4、动物脊髓神经细胞形态结构观察染剂：0．1％亚甲基蓝染液清洁玻片滴生理盐水取材涂散开盖上盖玻片染色观察HE染色方法：（苏木精-伊红染液）1）含义苏木精：碱性染料，使细胞核内的染色质及细胞质内的核糖体染成紫蓝色。伊红：酸性染料，细胞质和胞外基质中的成分染成红色。（1）、0.5~1%的伊红酒精溶液：称取伊红Y0.5~1g，加少量蒸馏水溶

4、解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精100毫升溶解。（2）、苏木精染液配方：(配制3000ml，可按比例减少)苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠1.2g冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木精溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。（3）、1%盐酸酒精分色液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可2）染色的步骤固定：入100%、95%、85%、70%酒精分别脱水2-5min，再入蒸馏水清洗3min。苏木精染液染色：5-15min脱色：蒸馏水漂洗2min

5、分色：1%盐酸酒精分色液分色5min，镜检脱色:流水冲洗20min，镜检漂洗：蒸馏水漂洗2min染色：1%的伊红酒精液染色3min脱水：70%、85%、95%、100%酒精分别脱水2-5min。（五）细胞大小的测量1、显微测微尺的用法（1）显微测微尺的组成（2）测量：长度的测量，厚度的测量和对圆形，椭圆形细胞的测量1）显微测微尺的组成分目镜测微尺和镜台测微尺，两尺配合使用。（1）镜台测微尺在一个载玻片中央封固的尺，长1毫米(1000μm)，被分为100格，每格长度是10微米。（2）目镜测微尺是一个放在目镜像平面上的玻璃圆片。圆片中央刻有一条直线，此线被分为若干格，每格代表的长度随不同

6、物镜的放大倍数而异。因此，用前必须测定。2）使用方法将镜台测微尺放在显微镜的载物台上夹好，小心转动目镜测微尺和移动镜台测微尺使两尺平行，记录镜台测微尺若干格所对应的目镜测微尺的格数。2、电脑软件图象处理系统（各种不同倍数下的）启动图像处理系统图像采集窗捕捉静态图像关闭图像采集窗测量校准向导装入标准图像确定物镜倍数校准圆直径（μm）校准标定名保存最小化DigilabII-cLogin确定选择细胞手动拍照拍照打开图像处理系统点线、点圆、点多边形寻找目标细胞实验报告要求:1、计算2—3个细胞的大小2、计算球形细胞的核质比3、绘人的口腔上皮细胞图并注明基本结构值日安排什么叫核质比？核质比NP

7、VnVc-VnNP≈0.5NP＞0.5NP＜0.5