细菌的生长和遗传变异

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1、第三章细菌的生长和遗传变异第一节细菌的生长和特性11细菌吸收营养物质以后，在酶的催化下进行各种新陈代射反应，如果同化作用大于异化作用，则细胞质的量不断增加，表现在细胞自身就是体积或重量的不断增加。这种现象叫生长。生长到一定阶段，细菌以二分裂的方式形成两个子细胞，这就是繁殖，其特征是细菌个体数增加。细菌的生长繁殖很快，适宜的环境下每隔20～30min分裂一次。细菌有没有年轻、年老之分？回答：有，但是细菌的所谓菌龄和人的老年、中年、幼年的概念不同。人是按出生之时算起，年纪越小越年轻，越大就越老。细菌则不然，细菌是以分裂法进行繁殖的，一般繁殖一代的时间，只要20

2、～30min，而且在一大群细菌中也无法区分每个细菌的年老年轻。因此细菌的所谓年龄是指一群细菌在一定的环境条件下生长而表现出来的待征。换句话说，描述细菌的生长往往用群体繁殖和生长所表现出来的待征来代表。一、细菌生长测定方法(一)直接测定1、显微镜直接计数法显微镜直接计数法又称全数法。它又分成下述几种：(1)涂片染色法将已知体积的待测样品，均匀地涂布在载玻片的已知面积内，经固定染色后计数菌数。一般藉助目测微尺的直径标准来计算细菌的数量。(2)计数器测定法采用特殊的细菌或血球计数器进行测定。操作过程是取一定体积的待测细菌样品放于计数器的测定小室与载玻片之间，由于

3、测定小室的体积是已知的，因此根据得到的计数值就可以计算出细菌含量。(3)比例计数法将待测样品溶液与等体积的血液混合，然后涂片，在显微镜下测定细菌与红血球数的比例，因血液中的红血球数已知(男性400～500万个／mL，女性350～450万个／mL)，由此可以测得细菌数量。血球计数板法2、比浊计数法这是测定悬浮细胞的快速方法。其原理是细菌细胞是不透光的，光束通过悬浮液时会引起光的散射或吸收，降低透光度，在一定范围内透光度与溶液的混浊度即细胞浓度成正比，籍此可以测定细菌浓度。采用这种方法时，为了得到实际的细胞绝对含量，通常须将已知细胞浓度的样品按上述测定程序制成

4、标准曲线，然后根据透光度或光密度值从标准曲线中直接查得细菌含量。（1）制标准曲线（OD600）（2）测菌液浊度，查图表得出细菌数量浊度仪或721分光光度仪(二)间接计数法间接计数法又称活菌计数法。它是通过测定样品中活的细菌数量来间接地表示细菌的含量。因此，这种方法不含死的细菌细胞，而且测定所需的时间也较长。它分下述几种方法：1、平板计数法将待测细菌样品先作10倍梯度稀释，然后取相应稀释度的样品涂布到平板中，或与未经融化的固体培养基混合、摇匀，培养一定时间后观察并计数生长的细菌数，最终根据细菌数和取样量计算出细菌浓度。一般计数平板的细菌生长菌落数以30～30

5、0个为宜。菌落数太多，计数时费时费力；菌落数太少，则计数结果误差太大。平板计数法是采用最广的一种活菌计数法。提问：前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？繁殖提问：细菌繁殖的可见现象是什么？产生菌落（固体培养基培养）、菌液混浊（液体培养基培养）计数原理：一个细菌可繁殖成一个菌落或一群细菌.缺点：慢分固体培养法和液体培养法无菌水平板计数法—固体培养法第一步：菌样巧妙稀释得到不同稀释度（10-x）菌液菌样被无菌水不同稀释倍率后平板培养图10-210-310-410-5各取1ml，均匀涂布于冷固体培养基平板上或与温热液态固体培养基混合冷却。第三步：培养稀释度

6、过低，菌落密集无法计数可以计数，但数量过多，费时费力数量合适，统计计算，作为结果数量太少，误差因素太大，不做计数第二步：接种平板每一个细菌会生成一个菌落一般计数平板的细菌生长菌落数以30~300个为宜。第四步：计数细菌数量=？细菌数量=数出的菌落数/稀释度例如：10-5稀释度时菌落数为125个细菌数量=125/10-5=1.25×107个/mL平板计数法是采用最广的一种活菌计数法如国标法水中细菌总数的测定。注意：作空白，取平行样（2～3组）均值，减小误差平均2、液体计数法液体计数法是根据统计学原理设计的一种方法。具体做法是；先将待测细菌样品作10倍梯度稀释

7、，然后取相应稀释度的样品分别接钟到3管或5管—组的数组液体培养基中，培养一定时间后．观察各管及各组中细菌是否生长，记录结果，再查已专门处理好的最可能数(mostprobablenumber，MPN)表，得出细菌的最终含量。因此，这种方法又叫最可能数法或MPN法。稀释液体计数法特点：液体培养、统计学查表计数又称MPN法（或最可能数法）MostProbableNumber例如测定SRB（硫酸盐还原菌，厌氧）的数量提问：能用稀释平板法计数吗？为什么？一般不能，厌氧菌暴露在空气中不能生长（除非厌氧培养箱）对这类菌可以利用它们生长时产生的硫化亚铁黑色特征进行深层隔氧

8、液体培养，按MPN法进行计数。332010-410-510-631