细菌的检查与防治原则

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1、第七章感染病病原学诊断与预防教学目的:掌握标本采集的原则、标本的处理方法及常用实验诊断技术。细菌真菌病毒感染病如何诊断？标本的采集和送检六原则遵守无菌操作选择不同采集时机和标本种类尽早采集在抗生素应用前采集正确的保存和运送第一节细菌感染病病原学检查直接关系到检测的准确性作好标记,化验单核对常见的临床标本1）血液标本：正常人的血液是无菌的。采集血液标本主要用于病原体培养、核酸检测及血清中抗原抗体检测。2）呼吸道标本：上呼吸道有正常菌群的存在，进行普通培养无特别意义，仅在疑似化脓性扁桃体炎、白喉、百日咳患者及脑膜炎奈瑟菌带菌者的

2、检查时，采集咽拭子、鼻咽拭子或化脓部位的分泌物，下呼吸道正常情况下无菌或仅有少量细菌侵入，但很快被清除。怀疑有支气管炎、肺炎及结核病的患者需采集下呼吸道标本，包括痰液、支气管灌洗液和气管镜毛刷等。采集下呼吸道标本应防止上呼吸道正常菌群的污染。3）尿液标本：正常人尿液是无菌的。但在前尿道有正常菌群和过路菌存在（大肠埃希菌、葡萄球菌），而后者又是常见尿路感染的病原菌。因此正确的采集尿液，避免其他菌群的污染是尿液细菌检验正确与否的关键。一些抗菌药物和代谢产物通过尿液排泄，因此尿液标本必须在使用抗菌药物之前采集。女性月经期不易采集标

3、本。常用的尿液细菌培养标本包括中段尿、肾盂尿、膀胱穿刺尿及晨尿。常见的临床标本4）脑脊液标本：正常人脑脊液是无菌的，从脑脊液中检出细菌均应作为病原菌看待。5）粪便标本：肠道内有种类和数量很多的正常菌群，因此粪便标本中包含有大量的正常菌群，通常需用选择培养基分离致病菌，此外菌群失调和菌交替症也可引起腹泻，因此对正常菌群的种类和比例的检查是不可或缺的。6）生殖道标本：正常的内生殖器官是无菌的，但外生殖器可有正常菌群的存在，在菌群失调时也可发生真菌性阴道炎、细菌性阴道炎或尿道炎等疾病。解剖结构的不同男性和女性生殖道采集的标本有：①

4、男性尿道、生殖道分泌物，前列腺液标本②阴道后穹窿分泌物及经阴道后穹窿穿刺盆腔脓液③外阴分泌物④采用双套管的方式插入子宫腔吸取分泌物7）脓液、胸腹水及分泌物等其他标本。致病菌的分离鉴定药物敏感试验标本涂片检查---染色和不染色---分离培养生化试验血清学鉴定动物试验明确诊断初步诊断分子生物学技术病原菌抗原检测—EIA、协同凝集试验、IF、CIE等涂片检查不染色标本的形态检查：观察细菌的动力及运动等活体状况。常用的方法有悬滴法、压滴法，该法不能看清细菌的形态结构特征。染色标本的形态检查：1）染色的原理和染料2）常用染料：酸性、碱

5、性、复合、单纯染料等3）染色方法：单染法、复染法（革兰染色、抗酸染色）、特殊染色致病菌的分离鉴定药物敏感试验标本涂片检查---染色和不染色---分离培养生化试验血清学鉴定动物试验明确诊断初步诊断分子生物学技术病原菌抗原检测—EIA、协同凝集试验、IF、CIE等细菌的接种与分离培养为了能鉴定和研究细菌，需要对细菌进行分离培养。大多数细菌可用人工方法培养，根据不同细菌给予适宜的培养条件，遵守实验操作的要求可以对细菌进行分离培养。1）无菌技术：细菌广泛存在于自然界中，如果环境或工作人员的皮肤、黏膜中的细菌混入检验标本或污染实验材料

6、，将严重影响检验结果的正确性。另外，临床标本都是具有感染性的含有病原体的传染源，如处理不当，容易引起实验室感染和医院感染，甚至严重的传染病大流行，因此在细菌学检验时必须随时防止标本污染和病原菌扩散的操作，即无菌技术或无菌操作。2）接种工具和场所：①接种针和接种环是细菌学实验室必需的工具②接种罩、无菌工作台、无菌室、生物安全柜是为了达到无菌技术要求而建立的细菌接种场所。培养基培养基（culturemedium）供细菌生长用的，由人工方法将多种营养物质根据细菌的需要组合成的混合营养基质。常用培养基种类（culturemedium

7、）特殊培养基基础培养基营养培养基选择培养基鉴别培养基培养基的制备过程称量溶解调PH过滤分装灭菌质量检验保存细菌的分离接种法平板划线接种（使标本中混在的多种细菌在培养基表面分散生长，形成各自菌落。便于根据菌落特征，挑取单个菌落进行纯培养）细菌的分离接种法平板划线接种细菌的分离接种法平板划线接种第二次划线区第三次划线区待分离标本涂布点第一次划线区平板划线接种细菌的分离接种法斜面接种（用于已获得的单个菌落的移种、纯种培养细菌和保存菌种及观察细菌的某些特性）细菌的分离接种法液体接种法（用于增菌培养）细菌的分离接种法穿刺接种法:此法主

8、要用于半固体培养基、明胶及双糖管的接种。用接种针取细菌少许，从半固体培养基中央，平行于管壁垂直刺入，接近管底但不可接触管底，然后接种针沿原路退出细菌的分离接种法测定牛乳、饮水和尿液等标本细菌数时常用此方法。常用于纸片法药物敏感性测定，也可用于被检标本中的细菌计数。细菌的培养方法1）普通培养