GBT18636-2002 蓝舌病诊断技术.pdf

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1、(;B/,r186362002前卜J本标准根据我国近二十年对蓝舌病诊断的研究成果和技术的发展，参考世界动物P.}几组织厂w。山!OrganizationforAnimalileaIth(#}),OfficeIntentionaldesEpizootic(法).()工G」标准性文件《世界动物I1.生组织推荐的诊断力一法和生物制品标准手册))2.1.9条“蓝占病”和澳大利亚动物疫病标雕诊断方法'"Bluetongue=帝而编写的〔本标准引用了GI3/T18089-200(A微量中和试验及病毒分离和鉴定方法》有关规定力法俄舌病是由库蝶传播、蓝舌病病毒引起的仗害反当动物的严重传染

2、病。蓝舌病病毒系呼肠孤病毒科环状病毒属t3群成员、国际已知有24个血清型，在血清学卜与环状病毒属相关病毒有交叉反应:该病毒主要引起绵羊发病和死亡牛及其他反=1动物常为隐性感染，但川通过媒介昆虫传播本病鉴于该病的诊断和检疫技术复杂，因此应建立该病的综合诊断技术标准.这是制定本标准的宗旨本标准规定的方法，分别适用于病At分离鉴定、病原检测、病毒血清'j}1鉴定和抗体检测等不同需要。木标准的附录A、附录日都是标准的附录，附录C是提示的附录。本标准山中华人民共和国农业部提出。本标滩山个国动物检疫标准化技术委员会归CI,本标准起草单位:云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室、农业部动

3、物检疫所、大津动植物检疫)1.)本标准主要起草人:张念祖、杨承谕、李志华、张富强、胡玉玲、张开礼、马洪超、赵祥平、向文彬.www.bzxzk.com.中华人民共和国国家标准GB/,r18636-2002蓝舌病诊断技术Diagnostictechniquesforbluetongue1范围本标准规定J蓝舌病的诊断技术和程序。本标雕适用于蓝舌病的诊断和检疫。4,5,6章用于病毒分离鉴定和病原检测,7,8章用于病毒的血清型鉴定，9,10章用于抗体检测。2引用标准下列标准所包括的条文.通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订.使用

4、本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。(B/f180892000蓝舌病微W血清中和试验及病毒分离和鉴定方法3病毒分离和鉴定3.1器械和设备3.1.1%孔组织培养板(平底，简称96孔板)，单道微量加样器(0.51'1一101

5、微镜及荧光显微镜I2试剂卜J材料12门肝素抗凝血采血竹3.2.2细胞:蚊子细胞(C6/36)、仓鼠肾细胞(BHK,)或非洲绿猴肾细胞(Vero)3.2.3细胞培养液及分散液(按常规配力配制)3.2.4&ir,病'p-s隆抗体(18n3B6,7D3n2)o12.5蓝r-病荧光抗体12.61()一11l1龄鸡胚。13病毒分离I11样品的采集和制备见(:B/"1'18089-2000中8.1。I12鸡胚接种见(.B门’18089-2000中8.2I13接种细胞33.3.1将捣碎的鸡胚肝组织离心，2000r/min,10min，取r.清液为避免不必要的“有传”‘先对待分离材料进行

6、捕获酶联免疫吸附(ELISA)试验(见第‘章)，将呈阳性的反应材料接种(;6/36细胞，睡份样.结接两管(瓶)，梅管(瓶)接。.2ml。将接种细胞置于30C温箱培养7d13.3.2吹打接种的('6/36细胞，接种于BHK细胞，侮份C6/36接种八管(瓶)BHK，旬管0.2ml，接种的BIIK细胞ti:于37(环境中，吸附th一hRAI生)竺兰全1夔鲤选竺2缨燮些堕生出现细中华人民共和国国家质里监督检验检疫总局2002-02-19批准2002-0501实施.www.bzxzk.com.GB/7门8636-2002胞病变〔CI'E)者收获，无细胞病变(CPE)者在BHK细胞育

7、传几代，仍无细胞病变弃之13.4病毒保存及1_作液的制备13.4门BHK=F.出现细胞病变的病毒悬液JB1ml‘无菌小管分装，作为原始毒，置80C保存。3.3-4.2川原始毒于BHK.细胞上扩增，分装保存，记为“原始毒+1”33.4.3“原始毒+11，按3.3.3.2方法增殖，分装、保存，作为贮存毒液3.3.4.4贮存毒液增殖分装，4C保存，作为工作毒液，用于病毒鉴定3.4病毒鉴定鉴定方法见GB月’18089-2000中9.1及本标准4.6d免疫酶染色(immunoenzymestain)4门器械和设备4.1.196孔组织培养