植物组织培养之培养基配制

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1、植物组织培养组织培养（tissueculture）细胞全能性（totipotency）：植物体的每个细胞携带着一套完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。组织培养（tissueculture）：在无菌条件下，分离并在培养基中培养离体植物组织（器官或细胞）的技术。②促进芽的分化：CTK/IAA高时，形成芽；低时形成根。+auxin+cytokininAuxinCytokininFig.28-9组培的应用快速繁殖脱除病毒培育新品种胚培养单倍体培养试管受精体细胞无性系的变异和筛选原生质体培养和细胞杂交基因工程育种植物种质资源的保存和交换次生代

2、谢物质的生产ABCD烟草的生长过程（A、B、C、D为不同生长时期）callusinductioncallusco-culturethefirstselectionrootageredifferentiationthesecondselection水稻转化烟草的组织培养培养基的配制接种前准备材料处理接种MS+6-BA1mg/L+NAA0.5mg/L每瓶50ml培养基琼脂粉用电子天平称量解剖刀、剪刀、鼻形镊9寸培养皿（内附滤纸）500ml无菌水两瓶废液缸、打火机、酒精灯酒精棉球、70%乙醇、0.1%升汞采回的烟草叶片流水冲洗干净，草纸擦干，备用。

3、无菌操作台上，裁剪成0.5×0.5cm叶片，放于70%乙醇中处理30秒，无菌水洗净，再放到0.1%升汞溶液中5分钟，无菌水冲洗干净，吸干防于培养基上。MS培养基配方（mg/L）大量元素NH4NO31650KNO31900KH2PO4170MgSO4·7H2O370CaCl2·2H2O440微量元素MnSO4·4H2O22.3ZnSO4·7H2O8.6H3BO36.2KI0.83NaMoO4·2H2O0.25CuSO4·5H2O0.025CoCl2·6H2O0.025Fe盐FeSO4·7H2O27.8Na-EDTA37.3有机物质盐酸硫胺素VB

4、10.4烟酸VB50.5盐酸吡哆醇VB60.5肌醇100蔗糖30g琼脂8g/LpH5.8培养基配制注意的问题微量元素应该精确到0.0001克，大量元素可精确到0.01克。大量元素母液倍数略低，一般为10～20倍，微量元素和有机成分一般为50～100倍。母液配制组合Fe盐的配制方法激素的配制和保存配制流程水（100ml）大量元素微量元素有机物质Fe盐蔗糖激素定容调节pH到5.8分装于盛有琼脂粉的锥形瓶中高压灭菌常用仪器设备培养条件实验要求配制六瓶两种激素浓度的培养基两瓶无菌水培养皿（中间包有滤纸6张）4个烧杯4个检查各自的鼻形镊、解剖刀外植体的

5、选择选择部位取材季节的选择器官发育年龄的选择取材大小的影响诱导的成功率：——脱分化和再分化的难易程度不同选取外植体外植体消毒灭菌的要求消毒剂使用浓度(%)去除难易消毒时间(分钟)效果评价酒精70-75易0.2-2好次氯酸钙9-10易5-30很好次氯酸钠0.5-5易5-20很好氯化汞0.1-0.3较难2-10最好过氧化氢10-12最易5-15好新洁尔灭0.5-5易20-30好抗生素类4-5(mg/L)较难5-30较好注：表面活性剂吐温的加入可以提高消毒剂的渗透力和杀菌效果。