第十六章药物分析中的新技术新方法

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1、第十六章药物质量控制中现代分析中的技术与方法手性分离色谱一、手性药物的现状手性药物（579）药物（1992）天然和半合成药物（556）合成药物（1436）非手性药物（857）单一异构体（73）外消旋体（506）手性药物（547）非手性药物（9）单一异构体（537）外消旋体（10）二、手性药物对映体的药效学差异1.治疗作用完全依赖一种异构体如：S(-)-α-甲基多巴2.药理作用差别不大如：异丙嗪3.药理作用类似，但反应强度有差别4.药理与毒理作用存在“质”的区别二、手性药物对映体的药动学差异1.吸收2.蛋白结合3

2、.代谢1.间接法拆分对映异构体即衍生化试剂法（CDR）2.直接法拆分对映异构体手性固定相法（CSP）手性流动相添加剂法（CMP）三、手性药物拆分的高效液相色谱法分类采用非手性固定相四、拆分原理：为了使对映体转化为化学和物理性质不同的非对映体，就要提供一种手性源（CDR），使待拆分的对映异构体（样品）、手性作用物（如固定相）和手性源之间形成一个非对映异构分子的络合物。三点手性识别模式(R)–SE+(R)–SA→(R)–SE–(R)–SA(S)–SA→(R)–SE–(S)–SA1.CDR柱前手性衍生化法：对映体混合物

3、以手性试剂作柱前衍生化，形成非对映体，然后以常规（偶见手性）固定相分离。对手性衍生化试剂的要求：高光学纯度。常用的手性衍生化试剂：羧酸衍生物类、胺类、异硫氰酸酯类、异氰酸酯类、萘衍生物类、光学活性氨基酸类、固相衍生化试剂。手性衍生化特点：需要高光学纯度的手性衍生化试剂；反应繁琐费时；衍生化反应速率重现性较差只需使用价格便宜、柱效较高的非手性柱衍生化过程可同时纯化样品柱前衍生化-反相高效液相色谱法拆分酮洛芬对映异构体S-()-酮洛芬R-(-)-酮洛芬酮洛芬对映体的柱前衍生化示意图＊＊酮洛芬对映体的柱前衍生化方

4、法酮洛芬对照品溶液(1mg/mL)0.1mL加入正己烷0.6mL二氯亚砜溶液0.2mL75℃1h冷却至室温吹干后加入S-NEA溶液0.2mL5min振摇加入2.0mol/LH2SO40.5mL混匀吹干后溶解进样二氯甲烷:乙醚2:1色谱条件色谱柱：HypersilC18,5m,1505.0mmID，流动相：乙腈水-乙酸-三乙胺(55:45:0.1:0.02，v/v)，流速：1ml/min,检测波长：254nm酮洛芬对映体衍生化物色谱图RS酮洛芬对映体衍生化物的保留时间为tR=7.3min，tR=8.5min，

5、分离度为1.92.CSP利用手性固定相与对映体消旋物相互作用，其中一个与手性固定相生成不稳定的短暂的对映体复合物，使两种异构体在色谱柱上的保留时间不同，从而得到分离。常用的手性固定相：1.Pirkle型固定相2.合成多聚固定相3.环糊精键合固定相特点适用范围广制备分离方便定量分析的可靠性高价格昂贵奈基乙脲键合硅胶柱拆分苏氨酸（A）和苯丙氨酸（B）的p-溴代苯甲酰胺衍生物对映体色谱图3.CMP将手性试剂添加到流动相中，利用手性试剂与药物消旋物中各对映体结合的稳定常数不同，以及药物与结合物在固定相上分配的差异，实现对

6、映体的分离。常用的手性添加剂：1.配基交换型手性添加剂2.手性离子对络合剂3.环糊精添加剂特点可采用普通的非手性固定相不需对样品进行衍生化手性添加物的可变范围较宽五、应用1．对某些手性药物进行对映体的纯度检查；2．生物体液中药物对映体的分离分析研究可探索血药浓度与临床疗效的关系；3．在研制手性药物过程中，可分别评价单个对映体的效价、毒性、不良反应、药动学性质；4．必要时，可进行手性药物对映体的制备分离（或拆分）。高效毛细管电泳（HPCE）HPCE是经典电泳技术与现代微柱分离相结合的一种快速、高效的液相分离技术。具

7、有以下特点：1.高效2.高速3.微量4.低消耗高压电源毛细管恒温系统检测器数据处理系统毛细管缓冲液/样品缓冲液（+）(－)毛细管电泳装置示意图（一）基本原理：v=veo+vep=(μeo+μep)Eveo：电渗流速度μeo：电渗流淌度vep：电泳流速度μep：电泳流淌度E：电场强度－－－－－－－－－－－－－－－－－－++++++++++++++++++++++++++(－)(+)电渗的产生－－－－－－－－－－－－－－－－－－(－)(+)++++++++++++++++----------------毛细电泳中不同

8、组分的迁移示意图（二）主要分离模式1.毛细管区带电泳（CZE）2.胶束动电毛细管色谱（MECC）3.毛细管凝胶电泳（CGE）4.毛细管等电聚焦（CIEF）模式缓冲液体系分离机理CZE自由缓冲液离子淌度MECC胶束－缓冲溶液疏水性/离子性相互作用CGE凝胶－缓冲溶液分子大小和荷电数目CIEF两性电解质等电点毛细管区带电泳最基本、最广泛的分离模式。适用于所有具有不同淌度的荷电