实验七 基因的图位克隆技术

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1、图位克隆：遗传学的经典策略孔忠新2012.05.21图位克隆的定义：图位克隆(Map-basedcloning)又称定位克隆(positionalcloning)，用该方法分离基因是根据目的基因在染色体上的位置进行的，无需预先知道基因的DNA顺序，无需预先知道其表达产物的有关信息。用该方法分离基因是根据功能基因在基因组中都有相对稳定的基因座，再利用分子标记技术对目的基因进行精确定位的基础上，用与目的基因紧密连锁的分子标记筛选DNA文库，从而构建目的基因区域的物理图谱，再利用此物理图谱通过染色体步移逐步逼近目的基因或通过

2、染色体登陆的方法，最终克隆目的基因并通过遗传转化实验可以研究目的基因的功能。图位克隆的原理：1.建立目的基因的遗传分离群体2.找到与目的基因紧密连锁的分子标记3.用遗传图或物理作图将目的基因定位在染色体特定位置4.构建含有大插入片段的基因组文库5.以与目的基因连锁的分子标记为探针筛选基因组文库6.用阳性克隆构建目的基因区域的重叠群7.通过染色体步移或登陆，获得含有目标基因的大片段克隆8.通过亚克隆获得目标的小片段克隆9.测序获得候选基因碱基序列10.通过遗传转化和功能互补验证，最终确定目标基因的功能。图位克隆的一般流程

3、：标记1基因标记2标记1基因标记223456BAC重叠群BAC重叠群12345初步定位精细定位6亲本1亲本2XF1123456789100geneF2标记1基因标记2标记1基因标记22345612初步定位精细定位2cM1.2cM0.02cM0.01cM标记1基因标记22BAC重叠群BACClone基因1基因2基因3基因4基因5基因6基因7基因1基因2基因3基因4基因5基因6基因7转基因突变体单倍型分析序列-功能1、需要有精确的遗传图谱；2、遗传图谱上离目的基因很近的分子标记在物理图谱上还相距甚远；3、高等植物基因组极其

4、复杂，存在大量重复序列，在实际操作中会遇到走不动的难题。图位克隆过程存在的问题：Thankyou!