实验四微生物的染色

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1、第十章微生物的实验实验一显微镜的使用及细菌,放线菌和蓝细菌个体形态的观察(一)目的(1)掌握显微镜的结构,原理,学习显微镜的操作方法和保养.(2)观察细菌,放线菌和蓝细菌的个体形态,学会生物图的绘制.(二)实验器材(1)显微镜,目测微计,物测微计,擦镜纸,香柏油,二甲苯.(2)示范片大肠杆菌小球菌蓝藻等（二）、实验内容1.显微镜的结构（1）.机械部分（2）.光学部分（2）光学部分a.目镜b.物镜:低倍物镜高倍物镜油镜物镜的性能由数值孔径决定数值孔径=n*sina/2显微镜的性能还依赖于物镜的分辨力分

2、辨力:能分辨两点之间的最小距离的能力增大数值孔径来提高分辨力.物镜N.A.1.25,100*,”OI”,160/0.17,16mm----N.A.1.25数值孔径100*放大倍数”OI”油镜160镜筒长0.17要求盖玻片的厚度16mm焦距C.聚光器d.反光镜f.滤光片2.显微镜使用和保护(1)低倍镜的使用法(2)高倍镜的使用法(3)油镜的使用法3.目测微尺,物测微尺及其使用方法(1)目测微尺(2)物测微尺(3)目测微尺的标定(4)菌体大小的测量4.细菌,放线菌和蓝细菌个体形态的观察(四)实验

3、报告实验三微生物直接计数法(一)目的（1）明确显微镜计数的原理．（2）学习使用血球计数板进行微生物计数的方法（二）仪器与材料　显微镜　血球计数板　移液管　酵母菌液（三）血球计数板的结构与计算方法（1）16＊25的计数板计算公式细胞数／ｍｌ＝125小格内的细胞数＊400＊10＊1000＊稀释倍数／125（2）25＊16的计数板计算公式细胞数／ｍｌ＝80小格内的细胞数＊4＊10＊1000＊稀释倍数／80四）操作步骤（1）稀释样品使每格约5个细胞（2）取干净的血球计数板，用厚盖玻片盖住中央的计数室，用移液管吸

4、取少许充分摇匀的待测菌液于盖片的边缘，菌液则自行渗入计数室，5～10min即可计数（3）将血球计数板置于载物台上，用低倍物镜找到小方格网后换用高倍镜观察计数每样品重复三次，取平均值，计算每1ml菌液中所含的酵母菌数。（五）试验报告实验四微生物的染色目的学习微生物涂片染色的操作技术,掌握微生物的普通染色法(单染色法)和革兰氏染色法实验仪器和材料实验步骤单染色革兰氏染色涂片干燥固定染色水洗吸干镜检取大肠杆菌和枯草杆菌芽孢杆菌(均以无菌操作)分别做涂片,干燥,固定.方法同单染色法用草酸铵结晶紫染色1min,

5、水洗.加革氏碘液媒染色1min,水洗斜置载玻片于一烧杯上,滴加95%酒精脱色,至流洗出的酒精不呈现紫色时,立即用水冲净酒精,脱色时间约20min,或视涂片厚薄而略有差异用番红(或称沙黄)染液染色1~2min,水洗吸干,置于显微镜下观察,阳性者为紫色,阴性者为红色革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度.如脱色过度,则阳性菌可被误染为阴性菌;而脱色不够时,阴性菌可被误染为阳性菌菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间过长,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈阴性反应实验五培养基的制备及灭菌一目的1玻璃仪器的洗涤和

6、灭菌前的准备工作2掌握培养基的配制方法3会干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法二实验材料三实验内容1玻璃器皿的洗涤剂包装A洗涤培养皿、试管、锥形瓶等可用去污粉或肥皂，自来水冲净。移液管用洗液浸泡在水冲净。干燥。B包装1）培养皿牛皮纸包装2）吸管的吸端塞棉花约1~1.5cm，(防细菌吸入口中，避免细管吹入)，松紧适宜。用包装纸包移液管尖端。3）试管和锥形瓶等的管口均堵棉塞，并用牛皮纸包裹。2培养基的制备A步骤1）配制溶液取一定容量的烧杯盛入定量无菌盐水，按培养基配方逐一称取各成分，加水溶解，可加热促进，不断搅拌

7、以防原料在杯底烧焦。2）调pH值测定培养液的pH,按要求以10%HClor10%NaOH调至所需pH。3）过滤用纱布、滤纸、棉花均可，若杂质少可省略4）分装将培养基分装在试管或锥形瓶中（放置培养基玷污管口，避免浸湿棉塞引起杂菌污染），装入试管的量视1试管的大小定，一般斜面培养基时为其高度的1/4~1/35）斜面培养基的制作将装有琼脂培养基的已灭菌的试管趁热取出，斜置于木棒上，使其斜面长度为试管的1/3~1/2，代培养基凝固后即成斜面B营养琼脂培养基的制备1）培养基配方：牛肉膏0.75g，蛋白胨1.5g，氯

8、化钠0.75g，琼脂3g，蒸馏水150ml，pH7.6。0.1Mpa下灭菌20min.2）操作：a取300ml烧杯一个，装150ml蒸馏水。b在药物天平上一次称取配方中各成分，水中溶解，带待琼脂完全溶解后停止加热，补充水分，用10%NaOH调pH=7.6，省略过滤，培养基分装五支试管中，余入250ml锥形瓶，塞上棉塞，包炸好待灭菌3无菌水制备1）取250ml锥形瓶装90ml蒸馏水，赛棉塞，包扎，待灭菌2）取5支18mm*18m